[发明专利]牙鲆成熟树突状细胞标志分子CD83的特异性抗体制备方法

说明书

本发明提供一种用于鉴定牙鲆成熟树突状细胞的特异性抗体，是用氨基酸序列为SEQ ID NO:1的多肽作为抗原制备的。本发明筛选获得了能够制备特异性抗体的抗原表位，制备重组蛋白作为抗原来制备抗体，制备抗体所提供的抗体可以从标志分子层面对树突状细胞进行鉴定，为检测牙鲆树突状细胞提供了重要工具。

技术领域

本发明属于鱼类免疫学技术领域，具体涉及一种用于鉴定牙鲆成熟树突状细胞的特异性抗体，以及使用该抗体来鉴定牙鲆成熟树突状细胞的方法。

背景技术

树突状细胞是专职的抗原递呈细胞，在组织中时以未成熟的形式存在，可以直接吞噬机体内的多种类型病原体，并在趋化因子等的作用下，在体内迁移到淋巴区，将抗原肽表达并运输到细胞表面，待T淋巴细胞进行识别，从而完成抗原递呈。鱼类是最早的具有获得性免疫的动物群体，具备发挥抗原加工和递呈功能所必需的分子机制，如MHC、TCR、BCR等。在斑马鱼中已通过分离培养单核细胞的方法获得树突状细胞，且培养获得的细胞树突状形态明显，可以引起混合淋巴细胞反应；对分离的树突状细胞进行KLH和LPS刺激后，CD83、MHCⅡ、CD80/86均出现上调表达。在虹鳟中，通过分离培养头肾单细胞的方法获得树突状细胞，细胞的形态特征与哺乳动物树突状细胞形态特征相符，具备吞噬、引起混合淋巴细胞反应及迁移等功能，对分离的树突状细胞进行poly I：C刺激后CD83、MHCⅡ的表达量均呈现上调表达。

由于缺乏树突状细胞标志分子的抗体，关于鱼类树突状细胞的鉴定方法目前大多还限于形态、功能以及标记分子的基因表达层面；即通过对细胞染色观察细胞形态、细胞核形状，判断其是否具备树突状细胞的形态特征；通过吞噬、迁移以及引起混合淋巴细胞反应的特性，判断其是否具备树突状细胞的功能特点。

但是，功能鉴定实验难免有细胞数量的要求，仅对体外培养的具有一定数量的树突状细胞有效，加重了操作的复杂性；而形态鉴定方法的检测结果并不够严谨。目前，T淋巴细胞的鉴定主要依赖于其表面特定表达的表面分子CD3/CD4/CD8等，而树突状细胞成熟状态下，特异性表达CD83。因此，以CD83分子为树突状细胞标志物，制备其特异性抗体，可使树突状细胞的鉴定更加高效和便利。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于鉴定牙鲆成熟树突状细胞的特异性抗体，以及使用该抗体来鉴定牙鲆成熟树突状细胞的方法；从而弥补现有技术的不足。

本发明首先提供一种用于鉴定牙鲆成熟树突状细胞的特异性抗体，是使用如下氨基酸序列的多肽作为抗原制备的；

GAVMGTVMECVSGADCVVQCFAEHVEGVQYRAVRWYRVRESSSSHLS GLLTRRLPNGTTTYYYGLDREVELLDESLSLYLPNVTCSDGGVYMCHLAAPL GEQNRDGQVLLILKDCPDGSKEKLTIDD(SEQ ID NO:1)；

所述的多肽，其编码基因的一种具体序列如下：

GGGGCAGTGATGGGCACTGTGATGGAATGTGTCTCAGGAGCAGATTGTGTTGTTCA

GTGCTTCGCTGAACATGTGGAGGGTGTTCAGTACCGAGCTGTGAGGTGGTACAGGGTCA

GAGAGTCTTCATCGTCTCATCTCAGCGGCCTCCTGACCCGACGCCTCCCCAACGGCACG

ACGACATACTACTATGGTCTGGACAGAGAGGTGGAGCTGCTGGACGAGTCCCTCAGCCT

CTACCTGCCCAACGTGACGTGCAGCGATGGCGGCGTGTACATGTGTCACCTGGCAGCAC

CTTTGGGAGAGCAGAACAGGGATGGGCAGGTCCTCCTCATTCTGAAAGATTGTCCCGAT