[发明专利]一种三联体融合蛋白及其在病毒自剪切蛋白酶抑制剂活性评估和筛选时的应用

权利要求书

1.一种三联体融合蛋白，其特征在于，所述三联体融合蛋白包括病毒自剪切蛋白酶和通过病毒自剪切蛋白酶的酶切识别序列连接在病毒自剪切蛋白酶的氨基端和羧基端的供体和受体，其中所述供体为发光蛋白或荧光蛋白，所述受体为荧光蛋白，作为供体的发光蛋白或荧光蛋白的发光光谱与作为受体的荧光蛋白的激发光谱相重叠；所述病毒自剪切蛋白酶是指病毒中可以催化剪切自身氨基端和羧基端序列的蛋白酶，为SARS-CoV-2的3CL蛋白酶；对应的酶切识别序列为以下9种组合中的任一种：

组合1：3CL蛋白酶氨基端：GVTFQSGFRK；3CL蛋白酶羧基端：GVTFQSAVKR；

组合2：3CL蛋白酶氨基端：HTVLQSGFRK；3CL蛋白酶羧基端：GVTFQSAVKR；

组合3：3CL蛋白酶氨基端：FTRLQSGFRK；3CL蛋白酶羧基端：GVTFQSAVKR；

组合4：3CL蛋白酶氨基端：GVTFQSGFRK；3CL蛋白酶羧基端：GVTFQSLENV；

组合5：3CL蛋白酶氨基端：GVTFQSGFRK；3CL蛋白酶羧基端：GVTFQAIASE；

组合6：3CL蛋白酶氨基端：GVTFQSGFRK；3CL蛋白酶羧基端：GVTFQSKMSD；

组合7：3CL蛋白酶氨基端：GVTFQSGFRK；3CL蛋白酶羧基端：GVTFQNNELS；

组合8：3CL蛋白酶氨基端：GVTFQSGFRK；3CL蛋白酶羧基端：GVTFQAGNAT；

组合9：3CL蛋白酶氨基端：VATVQSGFRK；3CL蛋白酶羧基端：GVTFQNNELS。

2.根据权利要求1所述的三联体融合蛋白，其特征在于，当所述供体为发光蛋白时，作为供体的发光蛋白和作为受体的荧光蛋白具体为一个荧光素酶和一个可以与该荧光素酶的发射光形成生物发光共振能量转移现象的荧光蛋白；当所述供体为荧光蛋白时，作为供体的荧光蛋白和作为受体的荧光蛋白具体为两个可以形成荧光共振能量转移现象的荧光蛋白。

3.一种权利要求1-2任一项所述三联体融合蛋白在蛋白酶抑制剂活性评估和筛选中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述应用具体为：

利用编码权利要求1-2任一项所述三联体融合蛋白的DNA或RNA在细胞内表达三联体融合蛋白，同时加入需要进行活性评估的候选抑制剂，培养细胞，待三联体融合蛋白在细胞内表达到一定水平后，通过检测生物发光共振能量转移或荧光共振能量转移信号，表征病毒自剪切蛋白酶的活性，用来评估病毒自剪切蛋白酶抑制剂的细胞活性，或者进行基于细胞的病毒自剪切蛋白酶抑制剂筛选。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，生物发光共振能量转移或荧光共振能量转移信号为受体荧光蛋白的发光信号与供体发光信号的比值。