[发明专利]一种三价铁络合的树状大分子/pDNA复合物及其制备和应用

权利要求书

1.一种三价铁络合的树状大分子/pDNA复合物，其特征在于，所述复合物为：表面修饰8-羟基喹啉-2-羧酸络合三价铁离子、内部包裹金纳米颗粒的第五代聚酰胺胺PAMAM树状大分子负载p53 pDNA，所述p53 pDNA为具有人体抑癌基因p53和绿色荧光蛋白EGFP基因的质粒。

2.一种三价铁络合的树状大分子/pDNA复合物的制备方法，包括：

（1）将8-羟基喹啉-2-羧酸HQC溶解于溶剂中，经EDC和NHS活化，加入到G5.NH₂溶液中，搅拌反应，透析，冷冻干燥，得到G5.NH₂-HQC；

（2）将步骤（1）中G5.NH₂-HQC溶于超纯水中，加入HAuCl₄·4H₂O水溶液，搅拌，加入含NaBH₄冰水溶液反应，透析，冷冻干燥，得到{(Au⁰)25-G5.NH₂-HQC}，即Au DENP-HQC；

（3）将步骤（2）中Au DENP-HQC溶于超纯水中，逐滴加入三价铁盐的水溶液搅拌，透析，冷冻干燥，得到Fe-Au DENP-HQC；

（4）将步骤（3）中Fe-Au DENP-HQC与p53 pDNA共同孵育，得到Fe-Au DENP-HQC/p53pDNA复合物，即三价铁络合的树状大分子/pDNA复合物，所述p53 pDNA为具有人体抑癌基因p53和绿色荧光蛋白EGFP基因的质粒。

3. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中溶剂为DMSO；G5.NH₂溶液的溶剂为超纯水；HQC、EDC和NHS的摩尔比为1 : 8~10 : 8~10；G5.NH₂与HQC的摩尔比为1 :25~35。

4. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中活化时间为2-4 h；搅拌反应温度为室温，搅拌反应时间为12~48h。

5. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中G5.NH₂-HQC与HAuCl₄·4H₂O的摩尔比为1 : 20~30HAuCl₄·4H₂O与NaBH₄的摩尔比为1 : 4~1 : 6。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中搅拌为：冰水浴条件下搅拌15~30min；反应是在冰水浴条件下反应2~3h。

7. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中三价铁盐为FeCl₃；AuDENP-HQC与三价铁盐的摩尔比为1 : 28~1 : 35。

8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中搅拌温度为室温，搅拌时间为2~4h。

9. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中Fe-Au DENP-HQC与p53 pDNA的N/P为2 : 1~20 : 1，其中N/P比为树状大分子的伯胺基与质粒p53骨架上磷酸基团的摩尔比；共同孵育时间为15-30分钟。

10.一种如权利要求1所述的复合物在制备肿瘤的荧光成像和铁死亡/基因联合治疗的诊疗剂中的应用。