[发明专利]一种多重PCR体系快速检测鸡快慢羽表型的方法

说明书

本申请提供了一种鸡快慢羽表型的分子鉴定方法，使用针对PRLR基因和SPEF2基因设计的引物K‑R1：SEQ ID NO.1、引物K‑F1：SEQ ID NO.2和引物K‑R2：SEQ ID NO.3进行扩增。相比传统PCR方法，本申请的3引物PCR方法节约成本，假阴性率低且判断准确。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域和鸡遗传育种领域，尤其涉及一种3条引物PCR体系快速检测鸡快慢羽表型的方法。

背景技术

在现代养鸡行业中，雌雄鉴别发挥着重要作用。而雌雄鉴别的技术主要有翻肛鉴别和金银羽色、快慢羽速自别雌雄等。由于翻肛鉴别需要鉴别人员掌握一定的技术，且在鉴别过程中会对雏鸡造成伤害，导致雏鸡死亡率增高。故为保证养鸡行业的经济效益，采用一种对鸡群无伤害的雌雄自别技术显得格外重要。

鸡的自别雌雄中，快慢羽速鉴别的应用最为广泛。羽速鉴别比翻肛鉴别速度快、准确率高、对雏鸡伤害小，不需要饲养人员掌握一定的技术，操作简单，直接凭肉眼分辨雏鸡快慢羽速即可鉴别公母。雏鸡在出生时，被羽主要为主翼羽和覆主翼羽。根据主翼羽和覆主翼羽的长短大小，可以将雏鸡分为快羽和慢羽。主翼羽明显长于覆主翼羽的为快羽，主翼羽等于或明显短于覆主翼羽的为慢羽。不同雏鸡个体翼羽的生长速度差异较大，主要是受Z染色体上的一对等位基因的控制。慢羽相对于快羽为显性，显性基因座用K表示，隐性基因座用k表示(Serebrovsky,1922)。目前，在家禽生产应用中，快慢羽自别雌雄已经建立许多商品鸡配套系。主要都是用快羽公鸡(kk)和慢羽母鸡(KW)杂交，所得后代公鸡均为慢羽(Kk)，母鸡均为快羽(kW)，且在雏鸡出壳24小时以内能够用肉眼区分，能快速准确的鉴别雌雄并分开饲养。因此，快慢羽基因被广泛应用于现代蛋鸡和肉鸡生产中，创造了巨大的经济效益。

Bacon等(1988)研究白来航中的ev21群体发现慢羽基因座K与禽内源性白血病毒(ev21)之间的存在紧密的连锁关系(遗传距离0.3cM)。因此，快慢羽的早期判断主要是通过检测个体中是否有内源病毒ev21的插入。有ev21插入的个体判为慢羽，没有插入的个体为快羽。但随后Boichard等(1994)研究发现在一些褐壳系鸡群中，少量快羽个体中也有ev21的插入，而且一些慢羽个体中不存在ev21的插入。在伊莎(ISA)肉鸡的一些品系中，发现了少量的慢羽个体并不存在ev21原病毒的基因序列。因此，仅凭是否有ev21的插入来鉴别快慢羽个体是不够的。Elferink等(2008)发现了快羽基因座k位点与慢羽基因座K位点的差异,推测了K/k等位基因座的结构：认为慢羽基因座K横跨PRLR基因和SPEF2基因，并有约176kb的串联重复，并开发了一种能够区分纯合与杂合晚羽雄性鸡的测试方法；随后罗成龙等(2012)利用了SNP对快慢羽杏花鸡羽速性状进行了基因组关联分析，证实了Elferink等人的猜想；卜贵鲜等(2013)在罗曼鸡的慢羽K基因座上发现了一个新的重复PRLR基因。

发明内容

本发明人通过大量创造性试验进行研究和探索，提供一种3条引物PCR体系快速检测鸡快慢羽表型的分子鉴定方法，该方法能准确、快速的鉴定鸡快慢羽的表型。

一方面，本申请提供了一种鸡快慢羽表型的分子鉴定方法，其特征在于，使用针对PRLR基因和SPEF2基因设计的引物组进行扩增。

进一步地，引物组中的引物序列为引物K-R1：SEQ ID NO.1；引物K-F1：SEQ IDNO.2；引物K-R2：SEQ ID NO.3；。

进一步地，方法包括DNA提取的步骤。

进一步地，方法包括以琼脂糖凝胶电泳检测的步骤。

进一步地，琼脂糖凝胶电泳检测中快羽个体只有一条带，长度为445bp；慢羽个体有两条带，长度分别为235bp和445bp；引物对K-F1和K-R1扩出445bp的条带，而引物对K-F1和K-R2扩出235bp的条带。