[发明专利]鳙微卫星标记引物及鳙标记放流效果评价方法

权利要求书

1.一种鳙微卫星标记引物，其特征在于：所述鳙微卫星标记引物包括10对微卫星引物，10对微卫星引物的序列及退火温度分别是：

2.一种基于如权利要求1所述的鳙微卫星标记引物扩增得到的鳙微卫星标记物。

3.一种基于如权利要求2所述的鳙微卫星标记引物对鳙进行放流效果评价的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：

1)对鳙进行打标；

2)对打标后的鳙进行样本采集，同时构建样本遗传档案；

3)将打标后的鳙放流；

4)放流群体的回捕；

5)对回捕的个体进行识别及鉴定，并计算被放流的鳙个体在回捕群体中的比例，所述比例是回捕率，根据回捕率的数值评价鳙增殖放流的效果。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述步骤1)的具体实现方式是：

1.1)选取待放流的鳙，并根据鳙的重量将待放流的鳙分为大个体鳙组以及小个体鳙组；所述大个体鳙组中鳙的体重大于10公斤；所述小个体鳙组中鳙的体重小于10公斤；

1.2)在大个体鳙组中鳙的腹腔内植入如权利要求2所述的鳙微卫星标记物；在小个体鳙组中鳙的背鳍上固定外挂标。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述步骤2)的具体实现方式是：对被放流的鳙进行剪鳍条采样并且记录好鳙的年龄、体重大小以及形态，利用微卫星标记技术鉴定每个鳙的遗传信息，统计每条被放流鳙的等位基因并构建样本遗传档案。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中构建样本遗传档案的具体实现方式是：

2.1)取所有放流鳙鳍条样品，提取鳙样品DNA；

2.2)基于权利要求1所述的鳙微卫星标记引物对鳙样品进行PCR扩增；所述PCR扩增的反应体系是25ul：10×PCR Buffer 3ul，2.5mmol/L dNTP 2ul，2mmol/L MgCl₂ 3ul，上下游引物各1ul，Taq酶0.5ul，DNA模板2ul，超纯水12.5ul；所述PCR扩增的反应程序为：94℃预变性3min；94℃变性30s，退火温度复性30s，72℃延伸30s，30个循环；72℃延伸10min；4℃保存；

2.3)将经过步骤2.2)PCR扩增后得到的产物在10％的聚丙烯酰凝胶上进行电泳分离；根据分离结果统计PCR扩增产物的基因型。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述步骤4)的具体实现方式是：对鳙进行放流后，在河流定点位置放置卫星信号接收器，收集卫星标信号，确定放流鱼活动范围。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述步骤5)的具体实现方式是：

5.1)查看回捕的鳙的背鳍是否有外挂标，并且检查回捕的鳙的腹部是否有放置卫星标时留下的刀口和缝合的痕迹，若有，则直接进行统计；若均没有，进行步骤5.2)；

5.2)利用微卫星标记技术对被回捕的鳙进行个体鉴定并进行统计；

5.3)根据步骤5.1)获取得到的统计统计数据以及经步骤5.2)鉴定后获取的数据，计算被放流的鳙个体在回捕群体中的比例，所述比例是回捕率，所述回捕率的公式为：(回捕样品中的放流群体数量/回捕样品总数量)×100％；

5.4)根据回捕率评价鳙增殖放流的效果；所述回捕率与鳙增殖放流的效果正相关。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述步骤5.2)的具体实现方式是：

5.2.1)提取被捕捞鳙的DNA；

5.2.2)基于如权利要求1所述的鳙微卫星标记引物对步骤5.2.1)所获取得到的鳙样品进行PCR扩增；

5.2.3)将步骤5.2.2)经过PCR扩增得到的产物在10％聚丙烯酰凝胶上进行电泳分离；根据分离结果确认回捕得到的鳙是否属于步骤2)所放流的鳙群体或经步骤2)所放流的鳙群体繁殖产生的后代群体，若是，则直接进行统计，若否，则退出对被回捕的鳙进行个体鉴定。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述步骤5.2.2)中PCR扩增的反应体系是25ul：10×PCR Buffer 3ul，2.5mmol/L dNTP 2ul，2mmol/L MgCl₂ 3ul，上下游引物各1ul，Taq酶0.5ul，DNA模板2ul，超纯水12.5ul；所述PCR扩增的反应程序为：94℃预变性3min；94℃变性30s，退火温度复性30s，72℃延伸30s，30个循环；72℃延伸10min；4℃保存。