[发明专利]一种硫代葡萄糖苷类化合物的检测方法

说明书

本发明属于分析化学技术领域，提供了一种硫代葡萄糖苷类化合物的检测方法。本发明中，采用硫代葡萄糖苷类化合物共有的二级质谱碎片，达到高效定性的目的；在这些二级质谱碎片中，基于m/z为96.0的碎片构建一套母离子(precursor ion)模式扫描定性方法，既能够保证检测灵敏度，又能提高定性准确率，减少假阳性检测结果；基于m/z为96.0的碎片为定量离子，利用硫代葡萄糖苷类化合物标准品，构建一套多反应监测(MRM)模式扫描定量方法，完成样品中所有硫代葡萄糖苷类化合物定量分析，破解因某些标准品获取困难导致的无法定量分析的难题，高效完成样品中该类化合物单独定量及总量测定。

技术领域

本发明涉及分析化学技术领域，尤其涉及一种硫代葡萄糖苷类化合物的检测方法。

背景技术

硫代葡萄糖苷(glucosinolates，GLS)简称硫苷，是十字花科蔬菜中重要的次生代谢产物，目前已发现的硫苷有100余种，不同品种蔬菜中的硫苷种类及含量有明显差异。根据硫苷中侧链R基团的不同，可把硫苷分为3类，分别为脂肪类、芳香类和吲哚类硫苷。当含有硫苷的蔬菜被食用或机械破碎时，会释放内源性的芥子酶(myrosinase)，其将硫苷中的β-硫苷键酶解，从而生成异硫氰酸酯(isothiocyanates)。研究表明，异硫氰酸酯具有抗癌、抗氧化、抗糖尿病等作用。其中，4-甲基亚砜基丁基硫苷(glucoraphanin)的酶解产物萝卜硫素(sulforaphane)是迄今为止发现的最强的Phase II酶诱导剂，能使致癌基因失去作用。

目前文献报道的对花椰菜中硫苷测定方法主要有以下几种：(1)近红外反射谱法(NIRS)，主要是通过已知标品建立红外分析模型，对比样品数据，快速测定硫苷含量；近红外反射谱法可以无损检测，采样量少，但是需要大量标品去建立可信模型。(2)荧光检测法，主要原理为硫苷在芥子酶的作用下降解得到葡萄糖，其在葡萄糖氧化酶作用下得到葡萄糖酸，再与试剂反应生成荧光活性物质；荧光检测法检测步骤繁多，会导致检测结果误差增大。(3)胶束电动毛细管电泳法(HPCED)，主要是利用硫苷分子所带电荷不同，加入表面活性剂，在硼酸盐缓冲体系中分离硫苷；胶束电动毛细管电泳法干扰因素少，成本低，但是分离时间长。(4)气相测谱法(GC)，即将硫苷酶解得到异硫氰酸盐，再用气相色谱测定；气相色谱法无法检测出受热易分解的硫苷。(5)采用高效液相色谱(HPLC)联合紫外检测器(UV)或者二极管阵列(DAD)测定硫苷，以及利用柱前衍生化(pre-column derivatization)对异硫氰酸酯进行衍生化修饰，再利用高效液相色谱(HPLC)进行测定；(6)采用高效液相色谱(HPLC)联合质谱(MS)方法测定硫苷及异硫氰酸酯；高效液相色谱因可同时测定各种硫苷的含量，重现性与精密度尚可，在实际应用中比较普遍，但是该方法的检测限及其灵敏度较差，在硫苷含量较低的花椰菜品种上存在方法应用的局限性。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种硫代葡萄糖苷类化合物的检测方法。本发明提供的检测方法检测限低、灵敏度高。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种硫代葡萄糖苷类化合物的检测方法，包括以下步骤：

待测样品和提取剂混合，依次进行提取和固液分离，得到上清液作为待测溶液；

利用第一超高液相色谱与质谱分析对所述待测溶液进行定性分析；

利用第二超高液相色谱与质谱分析对所述待测溶液进行定量分析，得到所述待测样品中硫代葡萄糖苷类化合物的色谱峰面积；

将所述待测样品中硫代葡萄糖苷类化合物的色谱峰面积代入硫代葡萄糖苷类化合物标准品的浓度-色谱峰面积标准曲线中，得到待测样品中硫代葡萄糖苷类化合物的含量；

所述第一超高液相色谱与质谱分析的参数包括第一超高液相色谱参数和第一质谱参数：

所述第一超高液相色谱参数包括：