[发明专利]一种检测乳清蛋白浓缩物对骨质疏松影响的方法

说明书

本发明涉及乳清蛋白功能检测技术领域，具体涉及一种检测乳清蛋白浓缩物对骨质疏松影响的方法。本发明提供一种检测乳清蛋白浓缩物对骨质疏松影响的方法，其包括：以斑马鱼作为实验动物构建骨质疏松斑马鱼模型，以乳清蛋白浓缩物处理所述骨质疏松斑马鱼模型，分析骨质疏松缓解效果。该方法实现了在体化、微板化、简单、高效地检测乳清蛋白浓缩物对骨质疏松的影响。本发明还发现乳清蛋白浓缩物具有抗骨质疏松、增强成骨细胞增殖与分化、增加骨密度、促进骨骼生长和发育的功能，对于乳清蛋白的应用推广具有重要意义。

技术领域

本发明涉及乳清蛋白功能检测技术领域，具体涉及一种检测乳清蛋白浓缩物对骨质疏松影响的方法。

背景技术

骨质疏松是由多种原因引起的一种全身性骨骼疾病，其特点是骨质量降低、骨组织微结构破坏、导致骨脆性增加、骨折风险增加。随着人口老龄化的增长，骨质疏松症在中老年人中的发病率逐渐增高，骨质疏松症使患者的行动受到较为严重的影响，骨折的发生率相对较高，从而影响患者的生活质量。传统的哺乳动物促进骨骼发育模型和毒性模型的构建耗时长且成本高，不适于早期高效筛选，较难进行微量成分促进骨骼发育活性的在体评价。

乳清蛋白是溶解、分散在乳清中的蛋白质，具有营养价值高、易消化吸收、含有多种功能性活性成分等特点。开发高效的乳清蛋白促进骨骼发育活性及其对骨质疏松的影响的检测方法对于乳清蛋白的功能检测和应用具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测乳清蛋白浓缩物对骨质疏松影响的方法。本发明的另一目的是提供乳清蛋白在制备防治骨质疏松、促进骨骼生长、发育等药物、食品、保健品或饲料中的应用。

具体地，本发明提供以下技术方案：

本发明首先提供斑马鱼在制备用于检测乳清蛋白浓缩物对骨质疏松影响的动物模型中的应用。

本发明发现，与其他动物相比，斑马鱼更适于作为检测乳清蛋白浓缩物对骨质疏松影响的实验动物，具有建模周期短、检测效率高、检测效果准确性高等优势。

基于上述发现，本发明提供一种检测乳清蛋白浓缩物对骨质疏松影响的方法，该方法包括：以斑马鱼作为实验动物构建骨质疏松斑马鱼模型，以乳清蛋白浓缩物处理所述骨质疏松斑马鱼模型，分析骨质疏松缓解效果。

本发明中，所述乳清蛋白浓缩物可通过市售途径购买获得或采用本领域常规技术手段制备得到。

上述方法中，所述骨质疏松斑马鱼模型的构建包括：采用泼尼松龙处理斑马鱼，所述泼尼松龙的处理浓度为22-28μmol/L。优选为25μmol/L。

上述方法中，所述乳清蛋白浓缩物的处理剂量为0.1-1μg/5条斑马鱼/24h。更优选为0.25-1μg/5条斑马鱼/24h。

优选地，所述乳清蛋白浓缩物的处理浓度为0.1-1μg/mL。更优选为0.25-1μg/mL。

优选地，所述乳清蛋白浓缩物的处理时间为从斑马鱼的2-4dpf至8-9dpf。更优选为从斑马鱼的3dpf至9dpf。

上述方法中，斑马鱼可培养在多孔培养板中，优选每孔4-6条。

具体地，采用25μmol/L的泼尼松龙复制斑马鱼骨质疏松模型，分别采用高、中、低剂量的乳清蛋白溶液、15μg/mL的依替膦酸二钠溶液处理骨质疏松斑马鱼至9dpf处死，同时设置正常对照组(养鱼用水处理正常斑马鱼)和模型对照组(25μmol/L泼尼松龙处理正常斑马鱼)。

上述方法中，在乳清蛋白浓缩物处理结束后，将乳清蛋白浓缩物处理后的斑马鱼处死，采用茜素红染色，分析斑马鱼头骨染色面积和累积光密度。