[发明专利]SARS-CoV-2中和抗体的检测试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及抗体检测领域，具体而言，提供了一种SARS‑CoV‑2中和抗体的检测试剂盒及其应用。该检测试剂盒利用竞争法对SARS‑CoV‑2中和抗体进行检测，通过同时应用SARS‑CoV‑2 RBD蛋白和NTD蛋白两种抗原模拟病毒感染时的作用位点，中和抗体可以竞争性阻断ACE2受体蛋白和AXL受体蛋白与作用位点的结合，从而实现中和抗体的检测。

技术领域

本发明涉及抗体检测领域，具体而言，涉及一种SARS-CoV-2中和抗体的检测试剂盒及其应用。

背景技术

新型冠状病毒（SARS-CoV-2）是2019年新发现的一种病毒，属于β属的新型冠状病毒，有包膜，颗粒呈圆形或椭圆形，常为多形性，直径60-140nm。经呼吸道飞沫传播是主要的传播途径，亦可通过接触传播。人群普遍易感，可导致肺部感染或病毒性肺炎疾病（COVID-19）。潜伏期一般为3-7天，最长不超过14天。以发热、乏力、干咳为主要表现，少数患者伴有鼻塞、流涕、腹泻等症状。重型病例多在一周后出现呼吸困难，严重者快速进展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒和出凝血功能障碍。

SARS-CoV-2基因组依次编码棘突蛋白（S）、包膜蛋白（E）、膜蛋白（M）和核衣壳蛋白（N）。S蛋白包含两个功能性亚基，分别是N端的S1和C端的S2，其中S1负责与宿主细胞受体结合，S2负责病毒膜和细胞膜融合。S蛋白介导病毒进入宿主细胞，对决定组织嗜性和宿主范围至关重要，负责新型冠状病毒与宿主细胞膜受体结合及膜融合，是新型冠状病毒中和抗体的重要作用位点以及疫苗设计的关键靶点。

新型冠状病毒疫苗是预防SARS-CoV-2病毒感染的有效方法。为了应对新型冠状病毒疫情威胁，目前已经有很多国家开始了疫苗接种工作，但接种新型冠状病毒疫苗后，产生的保护效果并不确定，评估新型冠状病毒疫苗有效性的重要指标之一就是接种者体内中和抗体的含量，因此建立安全、有效的中和抗体检测方法，评价疫苗注射后的免疫效果，对于疫情的全面防控具有重要的意义。

目前新型冠状病毒中和抗体检测方法中，“金标准”是真病毒中和试验，即用真病毒去感染细胞，然后观察接种者或者康复者的血清是否可以阻断病毒与细胞受体的结合，但真病毒中和试验对条件要求十分苛刻，生物安全风险较高，只能在生物安全三级防护（BSL-3）及以上实验室进行，而且非常耗时，通常要2天到4天才能完成。另一种方法是基于假病毒的中和试验，即将水痘病毒或疱疹病毒等病毒的某个蛋白替换成新型冠状病毒的S蛋白进行中和试验，其可以在生物安全二级实验室（BSL-2）操作，但仍需使用活病毒和细胞。

因此，针对大规模疫苗接种后的人群，需要更加简便、高效、灵敏、准确的检测方法，达到快速评估其体内中和抗体水平的目的。但目前相关的酶联免疫吸附和免疫层析等检测方法，在特异性、敏感性、时效性、自动化等方面的性能还有待提高。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种SARS-CoV-2中和抗体的检测试剂盒。

本发明的第二目的在于提供检测试剂盒的应用。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种SARS-CoV-2中和抗体的检测试剂盒，包括组分A和组分B；

组分A包括包被于固相载体的RBD蛋白和包被于固相载体的NTD蛋白；

组分B包括示踪物标记的ACE2蛋白和示踪物标记的AXL蛋白；

所述检测试剂盒还包括ACE2抗体和/或AXL抗体。

进一步地，组分A的RBD蛋白和NTD蛋白的工作浓度均独立地为0.2-200μg/mL，RBD蛋白和NTD蛋白的质量比为（1-10）：1；