[发明专利]一种酪氨酸磷酸化多肽的捕获方法在审
| 申请号： | 202110751640.6 | 申请日： | 2021-07-02 |
| 公开（公告）号： | CN113484122A | 公开（公告）日： | 2021-10-08 |
| 发明（设计）人： | 贾伟;郑乃中;刘怡;肖云;李志凤;胡祎瑶;喻勇兴 | 申请（专利权）人： | 嘉华药锐生物科技（昆山）有限公司 |
| 主分类号： | G01N1/34 | 分类号： | G01N1/34;G01N1/40;G01N27/62;C07K1/14 |
| 代理公司： | 北京高文律师事务所 11359 | 代理人： | 徐江华 |
| 地址： | 215300 江苏省苏州市昆山*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 酪氨酸 磷酸化 多肽 捕获 方法 | ||
1.一种酪氨酸磷酸化多肽的捕获方法，其特征在于：将SH2结构域变体与磁性颗粒材料偶联，此磁性材料可通过SH2结构域变体捕获酪氨酸磷酸化肽段，并可通过磁力作用将捕获组分与非目标组分的分离，捕获组分可用于后续质谱分析，鉴定酪氨酸磷酸化肽段。
具体为：将SH2结构域变体的N-端或氨基酸残基的氨基与具有能与氨基共价结合的活化磁性材料，通过反应共价链接，新的材料置于生物体蛋白的裂解多肽混合物中，新材料可通过可通过SH2结构域变体捕获酪氨酸磷酸化肽段，完成捕获后，可通过磁力作用将磁性颗粒及其捕获的酪氨酸磷酸化肽段与非酪氨酸磷酸化肽段分离，之后，捕获到的酪氨酸磷酸化肽段可以通过酸洗，从磁性材料上洗脱，洗脱组分可以通过质谱分析进行鉴定定性及质谱法定量。
2.根据权要求1所述的一种酪氨酸磷酸化多肽的捕获方法，其特征在于：可捕获复杂体系中的酪氨酸磷酸化肽段于磁性颗粒表面，实现酪氨酸磷酸化肽段与非酪氨酸磷酸化肽段物理空间的分布差异。
3.根据权要求1所述的一种酪氨酸磷酸化多肽的捕获方法，其特征在于：磁性颗粒通过SH2结构域变体的N-端或氨基酸残基的氨基与磁性颗粒的活化基团共价链接。
4.根据权要求1所述的一种酪氨酸磷酸化多肽的捕获方法，其特征在于：完成捕获后，可通过磁力作用将磁性颗粒及其捕获的酪氨酸磷酸化肽段与非酪氨酸磷酸化肽段分离。
5.根据权要求1所述的一种酪氨酸磷酸化多肽的捕获方法，其特征在于：捕获到的酪氨酸磷酸化肽段可以通过酸洗，从磁性材料上洗脱。洗脱组分可以通过质谱分析进行鉴定定性及质谱法定量。
6.根据权要求1所述的一种酪氨酸磷酸化多肽的捕获方法，其特征在于：SH2结构域变体氨基酸序列为：通过质谱采集得到的酪氨酸磷酸化肽段的二级质谱碎片进行对捕获到的酪氨酸磷酸化肽段进行氨基酸序列的定性鉴定，并要求质谱碎片信息支持磷酸化共价修饰在酪氨酸残基侧链上。
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