[发明专利]结核杆菌蛋白质内含子剪接抑制剂筛选系统、构建方法及其应用

权利要求书

1.一种结核杆菌蛋白质内含子剪接抑制剂筛选系统，其特征在于：以耻垢分枝杆菌为模式菌，将受蛋白质内含子调控的蛋白质的基因序列插入卡那抗性蛋白基因的65S处，以具有第一抗生素抗性的载体构建重组质粒，转入耻垢分枝杆菌后于含有第一抗生素和卡那霉素的培养基中培养，得到所述结核杆菌蛋白质内含子剪接抑制剂筛选系统；

所述受蛋白质内含子调控的蛋白质选自结核杆菌RecA intein、DnaB intein或SufBintein的全长或微型片段；所述第一抗生素为非卡那霉素的任一抗生素。

2.根据权利要求1所述的筛选系统，其特征在于：载体为PMV261载体。

3.一种权利要求1所述的筛选系统的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将受蛋白质内含子调控的蛋白质的基因序列插入卡那抗性蛋白基因的65S处，构建融合基因；

(2)将所述融合基因构建于具有第一抗生素抗性的载体中，得到重组质粒；

(3)将所述重组质粒转入耻垢分枝杆菌，得到重组耻垢分枝杆菌；

(4)将所述重组耻垢分枝杆菌接种于含有第一抗生素和卡那霉素的培养基中，得到所述结核杆菌蛋白质内含子剪接抑制剂筛选系统。

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于：在步骤(2)中，所述融合基因和载体的酶切位点均为BamHI和HindIII。

5.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于：在步骤(4)中，所述培养基中，卡那霉素的浓度为30-50μg/mL。

6.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于：在步骤(4)中，所述培养基中，第一抗生素的浓度为40-60μg/mL。

7.权利要求1所述的筛选系统在筛选结核杆菌蛋白质内含子剪接抑制剂中的应用，其特征在于，包括以下步骤：向所述筛选系统中加入结核杆菌蛋白质内含子剪接抑制剂，根据重组耻垢分枝杆菌的生长情况对所述结核杆菌蛋白质内含子剪接抑制剂进行高通量筛选。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：根据重组耻垢分枝杆菌菌液的OD值筛选所述结核杆菌蛋白质内含子剪接抑制剂。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：加入所述结核杆菌蛋白质内含子剪接抑制剂后培养90-110h。

10.权利要求1所述的筛选系统在筛选抗结核药物中的应用。