[发明专利]一种线性探针及利用其检测miRNA的方法

权利要求书

1.一种线性探针，其特征在于：所述线性探针至少包括a、b和c三个区域；

所述b区域的3’端和a区域的5’端相连，所述c区域的3’端和b区域的5’端相连；

所述a区域的核苷酸序列和靶标核酸互补配对，b区域的核苷酸序列通过减少空间位阻协助成环，c区域的核苷酸序列和靶标核酸5’端相同；

所述b区域是随机核苷酸序列，通过调节GC含量，以使上下游引物退火温度相近；

所述b区域是随机核苷酸序列，核苷酸为10~40bp。

2.根据权利要求1所述的线性探针，其特征在于：所述靶标核酸包括RNA和DNA。

3.根据权利要求1所述的线性探针，其特征在于：所述线性探针还包括d区域；所述d区域的3’端与c区域的5’端相连；所述d区域是延长线性探针的核苷酸序列，所述d区域是随机核苷酸序列，通过调节GC含量，以使上下游引物退火温度相近。

4.根据权利要求3所述的线性探针，其特征在于：所述d区域的5’端还可以包含c区域核苷酸序列。

5.一种利用线性探针检测靶标miRNA的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：

（1）采用权利要求1~4任一所述的线性探针将靶标miRNA逆转录为cDNA；

（2）以步骤（1）得到的cDNA设计PCR引物，PCR扩增进行检测；

所述步骤（1）具体包括以下步骤：

i、线性探针与靶标a* 区域退火杂交，探针 a 区域聚合延伸形成 c* 区域，形成的 a+c* 区域在反应温度下与靶标模板动态解离；

ii、探针延伸形成的 c*区域与探针原有序列 c区域互补配对，b区域核苷酸序列通过减少空间位阻协助成环，形成自身茎环结构形式的cDNA；

iii、同时，靶标模板得到释放，参与下一轮逆转录反应。

6.根据权利要求5所述利用线性探针检测靶标miRNA的方法，其特征在于：所述方法还包括检测扩增产物的步骤，所述检测扩增产物的方法包括荧光染料检测法、分子信标检测法或Taqman探针检测法。

7.根据权利要求5所述利用线性探针检测靶标miRNA的方法，其特征在于：所述miRNA包括合成的miRNA、从细胞或组织中提取的含miRNA样品或含有miRNA的提取液。

8.一种利用线性探针检测靶标核酸的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括权利要求1~4任一所述的线性探针。