[发明专利]异源三聚体化结构域、异源三聚体化融合蛋白、制备方法及应用

权利要求书

1.一种异源三聚体化结构域，其特征在于，所述异源三聚体化结构域由病毒囊膜糖蛋白结构域多肽片段的DNA碱基经位点定向突变而形成，定向突变后的异源三聚体化结构域中每条多肽的N端含有一个长形的a-螺旋片段、C端含有一个反向平行的短形的a-螺旋片段，这两个螺旋片段之间由一个柔性小环相连接；

所述位点定向突变使长形a-螺旋片段上引入2个S-S共价键位点；

所述定向突变的位点分别是多肽片段的G29C和F30C；所述异源三聚体化结构域多肽氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的一种异源三聚体化结构域，其特征在于，所述异源三聚体化结构域多肽氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，DNA序列如SEQ ID NO.6所示。

3.一种异源三聚体化融合蛋白组合物，其特征在于，选自S-TD三聚体蛋白、RBD-TD三聚体蛋白或H7-TD三聚体蛋白；其中各三聚体蛋白由如下(1)和(2)组成：

(1)权利要求1或2所述异源三聚体化结构域部分的多肽，所述异源三聚体化结构域部分的多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；

(2)与权利要求1或2所述异源三聚体化结构域部分的多肽的N-末端连接的待三聚体化的非结构域的融合蛋白多肽；

所述S-TD三聚体蛋白的待三聚体化的非结构域的融合蛋白多肽的氨基酸序列如SEQID NO.2所示；

所述RBD-TD三聚体蛋白的待三聚体化的非结构域的融合蛋白多肽的氨基酸序列如SEQID NO.3所示；

所述H7-TD三聚体蛋白的待三聚体化的非结构域的融合蛋白多肽的氨基酸序列如SEQID NO.4所示。

4.权利要求3所述异源三聚体化融合蛋白组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)对结构域多肽的G29C和F30C两个位点的DNA碱基进行PCR定点突变得到三聚体化结构域DNA片段；回收三聚体化结构域DNA片段，并将该DNA片段克隆至质粒载体，构建三聚体化结构域重组质粒，突变后结构域多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；

(2)将待三聚体化的非结构域的融合蛋白多肽基因片段插入到三聚体化结构域重组质粒形成异源三聚体化融合蛋白重组质粒；所述待三聚体化的非结构域的融合蛋白多肽基因片段的核苷酸序列选自如SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7或SEQ ID NO.8所示的核苷酸序列；

3)将异源三聚体化融合蛋白重组质粒克隆至表达质粒载体，获得异源三聚体化融合蛋白的重组表达质粒载体；

(4)将所述异源三聚体化融合蛋白的重组表达质粒载体转染宿主细胞，回收宿主细胞培养上清液，提取纯化异源三聚体化融合蛋白组合物。

5.根据权利要求4所述的异源三聚体化融合蛋白组合物的制备方法，其特征在于，所述宿主细胞选自真核细胞或原核细胞。

6.根据权利要求5所述的异源三聚体化融合蛋白组合物的制备方法，其特征在于，所述宿主细胞选自昆虫细胞、哺乳细胞、大肠杆菌细胞、真菌细胞中的任一种。

7.一种疫苗，其特征在于，所述疫苗包括权利要求3所述的异源三聚体化融合蛋白组合物。

8.根据权利要求7所述的一种疫苗，其特征在于，所述疫苗还包括佐剂，所述佐剂选自铝盐佐剂、CpG Toll-Like佐剂、水包油包水佐剂、角鲨烯佐剂、植物油佐剂、脂质体佐剂、纳米颗粒佐剂或弗氏佐剂中的至少一种。

9.权利要求3所述异源三聚体化融合蛋白组合物在制备疫病病毒抗体检测制剂或疫病病原监测制剂中的应用，其特征在于，所述制剂包含ELISA检测试剂盒、胶体金试纸条、化学发光检测盒或荧光发光检测盒中的任一种。