[发明专利]自身免疫性脑炎相关的NMDAR重组蛋白、其编码序列、制法和应用

说明书

本发明公开了自身免疫性脑炎相关的NMDAR重组蛋白、其编码序列、制法和应用，属于生物技术领域。本发明的自身免疫性脑炎相关的NMDAR重组蛋白的编码序列如SEQ ID NO.1所示；重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。重组蛋白的制备方法包括：将SEQ ID NO.1所示的编码序列连接重组载体，构建重组蛋白表达载体；转化进大肠杆菌的感受态细胞，培养，得到重组蛋白表达菌株；提取质粒，转染入CHO‑S细胞中培养；收集细胞上清，纯化，得到重组蛋白。本发明还提供了重组蛋白在制备抗NMDAR自身抗体检测材料中的应用、以及抗NMDAR自身抗体检测试剂盒。本发明的NMDAR重组蛋白通过异源重组表达NR1‑ATD，能被患者血液中的抗NMDAR自身抗体识别，且在体外大量表达，降低生产成本，并能实现定量检测。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及自身免疫性脑炎相关的NMDAR重组蛋白、其编码序列、制法和应用。

背景技术

自身免疫性脑炎(Autoimmune Encephalitis，AE)是自身免疫机制介导的神经系统炎性疾病，可影响边缘系统、脑干和小脑，以急性或亚急性起病。典型的临床表现有记忆力下降、癫痫发作、精神异常和认知功能障碍等。自身免疫性脑炎起病初期症状不明显，但家人常因其怪异行为就诊于精神科，错过早期最佳诊断。另外，该病和感染性脑炎在病因、临床表现、诊断标准等方面均有许多类似和难区别的地方，最大不同在于AE患者血清或脑脊液中存在抗神经元抗原抗体。

AE主要包括抗细胞内抗原相关抗体脑炎(也称经典的副肿瘤性脑炎(PNDS))和抗细胞表面抗原或突触蛋白相关抗体脑炎等。其中，抗N-甲基D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartatereceptor，NMDAR)脑炎是目前最常见的AE类型，约占AE患者的80％左右，其发病率可能超过病毒性脑炎。NMDAR由不同的亚基构成异四聚体，亚基组成主要包括NR1(NDMAR1)、NR2和NR3。NR1是NMDAR必不可少的组成亚基，可结合甘氨酸，为该受体的功能单位。经研究表明，目前抗NMDAR脑炎诊断主要依据是NR1亚基IgG抗体(+)，NR1亚基IgG抗体在抗NMDAR脑炎患者脑脊液中阳性率为100％，抗NMDAR抗体检测对抗NMDAR脑炎的诊断具有非常高的敏感性和特异性。

目前实验室检测最常见的方法是免疫印迹法和间接免疫荧光法(IFA)，生产该检测试剂盒的均是欧洲和美国厂家，成本高昂，在临床实践中存在检测范围有限、难以实现自动化等实际问题，而且上述研究方法均属于定性检测范畴，无法真正实现自身抗体水平的早期发病、治疗和康复阶段的实时大量检测。

发明内容

为了避免上述不足，本发明提供了一种NMDAR重组蛋白，通过异源重组表达NMDAR蛋白，能被患者血液中的抗NMDAR自身抗体识别，且在体外大量表达，实现相应抗原生产的低成本和国产化，并且能实现定量检测。

本发明采用的技术方案如下：

本发明所述的自身免疫性脑炎相关的NMDAR重组蛋白的编码序列，所述编码序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明所述的编码序列编码的重组蛋白，所述重组蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示。

本发明所述的一种重组蛋白表达载体，所述重组蛋白表达载体含有SEQ ID NO.1所示编码序列的质粒载体。

申请人发现，NR1亚基的细胞外氨基末端结构域(ATD：氨基酸1-561)是抗NMDAR脑炎患者自身抗体结合的主要抗原表位区，此外肽序列RNPSDK(氨基酸673–678)也是脑炎识别的关键抗原表位，它们对抗NMDAR脑炎患者自身抗体起主要识别作用。