[发明专利]一种角膜损伤修复的生物材料及其制备方法与应用

权利要求书

1.脂肪间充质干细胞来源的脱细胞基质在制备角膜结构和功能修复产品中的用途；所述角膜结构和功能修复产品至少具有以下功用：1)促进角膜上皮细胞生长；2)促进角膜缺损修复；3)促进角膜神经修复；4)促进角膜损伤后产生的眼表炎症吸收；

所述脂肪间充质干细胞来源的脱细胞基质的制备方法，包括获取脂肪间充质干细胞，传代培养和脱细胞基质的制备；

所述脱细胞基质的制备包括以下具体步骤：弃去传代培养后培养皿中所有培养液，用PBS缓冲液润洗后，加入脱细胞液，静置，用PBS缓冲液冲洗后加入DNA酶，置于培养箱中培养；最后用PBS缓冲液进行洗涤，置于黑暗中，4℃保存。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述获取脂肪间充质干细胞包括以下具体步骤：取获得的脂肪组织，洗涤后剪碎，浸泡在消化液中进行消化；消化完成后，离心、留沉淀，即得脂肪间充质干细胞。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述获取脂肪间充质干细胞还包括以下特征中的一项或几项：

a)所述脂肪组织为抽脂或者重睑手术中获得的脂肪组织；

b)所述洗涤介质为PBS缓冲液+100U/mL青霉素/链霉素；

c)所述消化液为0.1～0.2％的胶原酶A；

d)所述消化的温度为37℃，消化时间为8～10h；

e)所述离心条件为：转速1000～1200rpm，时间8～12min。

4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述传代培养包括以下具体步骤：用培养液重悬获取的脂肪间充质干细胞，置于培养箱中培养，待细胞长至80％～90％密度时进行传代，停止传代后，更换培养液，进行3～4周的培养。

5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述传代培养还包括以下特征中的一项或几项：

a)所述培养液配方为：DMEM+10％牛血清+100U/mL青霉素/链霉素；

b)所述培养箱的培养条件设定为温度37℃，5％CO₂；

c)所述传代具体包括以下步骤：弃去培养液，用PBS缓冲液润洗，加入0.1％胰酶进行消化；用含血清的培养液进行中和后，离心；弃去上清，用培养液重悬，1:3～4传代；

d)停止传代后所用培养液配方为：DMEM+10％牛血清+100U/mL青霉素/链霉素+50μmol/L维他命C。

6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述传代还包括以下特征中的一项或几项：

a)所述消化的温度为37℃，消化时间为8～10h；

b)所述离心条件为：转速600～1000rpm，时间3～5min；

c)所述培养液配方为：DMEM+10％牛血清+100U/mL青霉素/链霉素；

d)所述培养箱的培养条件设定为温度37℃，5％CO₂。

7.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述脱细胞基质的制备还包括以下特征中的一项或几项：

a)所述脱细胞液的配方为0.5％Triton+20mmol/L NH₄OH+PBS缓冲液；

b)所述静置时间为4～10min；

c)所述DNA酶的浓度为100U/mL；

d)所述PBS缓冲液冲洗次数为2～5次；

e)所述培养箱的培养条件设定为温度37℃，5％CO₂；

f)置于培养箱培养时间为1～2h。