[发明专利]乌苯美司原料药中α-苯乙胺杂质检测方法

说明书

本发明提供了一种乌苯美司原料药中的基因毒杂质α‑苯乙胺的检测方法，该方法检测灵敏度高，检测限浓度约为0.015μg/ml（5ppm），定量限浓度约为0.045μg/ml（15ppm）远低于α‑苯乙胺限度浓度0.15μg/ml（50ppm）；检测专属性好，重复性好，检测方法准确可信，能够实现乌苯美司原料药中基因毒α‑苯乙胺的有效控制，能够减少乌苯美司原料药制备的制剂产品的用药的相关副作用，提高产品质量。

技术领域

本发明涉及药物分析领域，具体涉及乌苯美司原料药中的α-苯乙胺杂质的检测方法。

背景技术

乌苯美司(Ubenimex；Bestatin)是从橄榄网状链霉菌的培养液中分离而得的一种低分子 二肽化合物，它具有抑制肿瘤细胞表面氨基肽酶B、N和亮氨酸氨基肽酶作用，诱导肿瘤细 胞凋亡和促进宿主细胞免疫功能，增强抗癌作用的双重功能，于1987年在日本上市。乌苯美 司在临床上常和其他化疗药物联合应用于急性髓性的白血病、慢性髓性的白血病、肺鳞癌、 恶性黑色素瘤、胃瘤等的治疗；和放疗联合，用于鼻咽癌等肿瘤疾病的治疗，还用于各种因 素引起的免疫功能低下者，试用于骨髓发育不良综合症及单纯红细胞再生不良症的治疗。各 种临床结果反馈该药物在增强人体免疫能力方面具有显著疗效，乌苯美司能显著提高癌症患 者的生存率，改善其生活质量。乌苯美司化学名为N-[(2S,3R)-4-苯基-3-氨基-2-羟基丁酰]-L- 亮氨酸，结构式下：

最早合成乌苯美司的方法是生物化学的细菌发酵方法，由Umezawa H等公开于J.Antibiot.1976,29,97。随着全球对乌苯美司需求不断增加，仅通过发酵生产乌苯美司已经不能 满足药品市场的需求，而利用化学合成的方法更有利于工业化生产，越来越多的化学合成方 法被报道。但由于乌苯美司结构复杂，结构中的肽键对酸碱敏感，且高温下不稳定，已报道 的一些合成路线需要使用昂贵实际和危险化学品或产品纯度太低，因此能应用于工业化生产 的路线目前只有一条，由抗生素杂志(Journal of Antibiotics，1983,36(6)：695-699)发表， 反应路线为：

该合成路线中使用了S-(-)-MBA即S-(-)-α-苯乙胺，根据EMEA中《遗传毒性杂质限度指导原则》，α-苯乙胺为基因毒杂质。基因毒性杂质是指能直接或间接作用于DNA，从而引起基因突变、染色体断裂或染色体重组的一类杂质，即使暴露于低水平剂量也可能诱发癌症。 基因毒性杂质可能作为药物合成过程中的起始原料、反应物、催化剂、试剂、溶剂、中间体、 副产物或贮藏运输过程中的降解产物而被引入到终产物中，影响药品的质量，危害患者的身心 健康，因此需严格控制药品中基因毒性杂质的含量。

乌苯美司片剂规格为10mg/片，最大日使用剂量为3片，基于人用药品注册技术要求国际 协调会(ICH)M7指导原则，以TTC(毒理学关注阈值)为1.5μg/天进行评估，要求乌苯美 司中任一单一基因毒性杂质限度为50ppm。该浓度限度极低，且基因毒性杂质反应活性高、稳 定性差，因此药物中此类痕量杂质的分析极具挑战性，要求分析方法具有较高的灵敏度和特异 性。乌苯美司原料药中的α-苯乙胺杂质检测分析方法未见文献报道，为保证乌苯美司药品的 用药安全，有必要开发灵敏度高，专属性好的检测方法用于乌苯美司原料药中α-苯乙胺杂质 的含量控制。

发明内容

本发明提供了乌苯美司原料药中的α-苯乙胺杂质检测方法，该方法快速、准确、检测限 低，可对乌苯美司中可能残留的α-苯乙胺进行有效的含量控制，保证乌苯美司原料药进一步 制备的乌苯美司制剂产品的用药安全。

本发明提供的乌苯美司原料药中α-苯乙胺杂质检测方法，其特征在于，采用气相色谱- 质谱联用色谱法测定，其中所用气相色谱采用挥发性胺毛细血管色谱柱，所用溶解溶剂为体 积比为99:1的乙腈：DBU，柱温采用程序控温的方式。