[发明专利]一种阴道上皮细胞培养基及其应用

说明书

本发明公开了一种阴道上皮细胞培养基及其应用。一种阴道上皮细胞培养基，除基础培养基外还包含以下组分：还包括EGF 4‑6ng/ml和bFGF 5‑7ng/ml。所述的基础培养基为DMEM‑F12基础培养基加Nutridoma 0.2‑1mg/ml，青链霉素双抗100单位/ml，丙酮酸5‑20mg/L，L‑谷氨酰胺3‑6mg/ml。本发明培养基可显著促进原代阴道上皮细胞的贴壁及克隆生长。在传代后，本发明培养基能够维持阴道上皮细胞的细胞特征和干性，并促进其增殖，抑制其凋亡。

技术领域

本发明属于细胞培养技术领域,涉及一种阴道上皮细胞培养基及其应用。

背景技术

先天性无阴道或阴道发育不全、盆腔廓清术后阴道缺如或狭窄等患者常需要阴道重建。重建阴道需要功能细胞，而其中最主要的为阴道上皮细胞。但是，阴道上皮细胞属于鳞状上皮细胞，为终末端分化细胞，存在传代、扩增困难的问题。一般来说，分离的原代上皮细胞第一代容易生长，但从第二代开始，很难用传统培养基进行传代扩增，容易出现分化、衰老甚至死亡的情况。虽然对于其它器官上皮细胞的培养和扩增已有所报道，但是这些器官的上皮细胞一般为非复层鳞状上皮细胞，而且这些器官上皮细胞的生长环境与阴道上皮细胞完全不同，因此培养这些器官上皮细胞的培养基不能直接用来进行阴道上皮细胞的培养。至今，对于阴道上皮细胞的培养，尤其是用于促进阴道上皮细胞扩增、传代的培养基尚未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于人阴道上皮细胞培养、扩增的培养基。而用本培养基培养的阴道上皮细胞可用于阴道重建。

本发明的目的可通过以下技术方案实现：

一种阴道上皮细胞培养基，除基础培养基外还包含以下组分：还包括EGF 4-6ng/ml和bFGF 5-7ng/ml。

作为本发明的一种优选，所述的基础培养基为DMEM-F12基础培养基加Nutridoma0.2-1mg/ml，青链霉素双抗100单位/ml，丙酮酸5-20mg/L，L-谷氨酰胺3-6mg/ml。

作为本发明的进一步优选，所述的阴道上皮细胞培养基还包含wnt3α3-5ng/ml、R-spondin1 5-8ng/ml、Noggin 5-6ng/ml、FGF10 4-5ng/ml。

作为本发明的更进一步优选，所述的阴道上皮细胞培养基还包含wnt3α5ng/ml、R-spondin1 5ng/ml、Noggin 5ng/ml、FGF10 5ng/ml。

一种阴道上皮细胞培养方法，用本发明所述的培养基进行培养。

作为本发明的一种优选，培养条件为：分离获取原代阴道上皮细胞后，铺于培养板中，然后加入适量上述阴道培养基。在细胞融合度达到80％左右后，继续用此培养基进行传代扩增。

有益效果：

本发明培养基可显著促进原代阴道上皮细胞的贴壁及克隆生长。在传代后，本发明培养基能够维持阴道上皮细胞的细胞特征和干性，并促进其增殖，抑制其凋亡。

附图说明

图1不同配方培养基培养人阴道上皮细胞情况(P1-P3代)。

图2三种培养基培养人阴道上皮细胞转录组分析。

A：2^#、3^#及4^#培养基培养的人原代阴道上皮细胞(P0)及培养1代(P1)的细胞转录组测序分析。

B：P1代阴道上皮细胞在2^#、3^#及4^#培养基培养条件下上皮、干性、增殖、衰老、自噬等基因的heatmap图。

具体实施方式