[发明专利]神经递质谷氨酸探针浮萍的制备方法

说明书

本发明提供了一种神经递质谷氨酸探针浮萍的制备方法，包括以下步骤：获得原代实验材料；获得大量传代浮萍；获得浮萍愈伤组织；获得携带谷氨酸探针基因用于侵染的农杆菌；大量扩增用于侵染的农杆菌；裂解农杆菌使得质粒被释放出来，与愈伤组织结合；使质粒与愈伤组织充分结合；给质粒提供侵染的环境并给愈伤组织提供恢复状态的环境；洗去黏附在愈伤组织上未被完全裂解的农杆菌；使愈伤组织再生成浮萍。本发明获得的浮萍中携带谷氨酸探针基因，谷氨酸探针可以与谷氨酸结合产生荧光，由此可验证浮萍内积蓄谷氨酸的情况。

技术领域

本发明涉及水环境技术领域，特别是涉及一种神经递质谷氨酸探针浮萍的制备方法。

背景技术

浮萍是单子叶水面漂浮植物，隶属于浮萍科浮萍属，广布于世界各地，其个体小，扩繁快，对环境的适应能力强，对盐碱水环境有一定的抗性，对重金属镉离子有富集能力。但是，对于浮萍富集重金属的生理机制和分子机制尚未阐明。常规野生浮萍无法直接应用于机制研究中，重金属污染水境的生态学修复和植物抗重金属应用的研究难以开展，一种可用于机制研究的浮萍有待于进一步研究和开发。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中存在的浮萍富集重金属的生理机制和分子机制研究难以开展的问题，而提供一种神经递质谷氨酸探针浮萍的制备方法。

为实现本发明的目的所采用的技术方案是：

一种神经递质谷氨酸探针浮萍的制备方法，包括以下步骤：

步骤1，采集浮萍；

步骤2，对步骤1采集的浮萍置于浮萍液体培养基内进行继代培养；

步骤3，夹取步骤2得到的浮萍植株，放置在诱导培养基上进行诱导培养，以获得浮萍愈伤组织；

步骤4，构建携带谷氨酸探针基因用于侵染的农杆菌-iGluSnFR农杆菌；

步骤5，活化iGluSnFR农杆菌；

步骤6，裂解iGluSnFR农杆菌使得质粒被释放出来，与愈伤组织结合：利用共生培养液溶解iGluSnFR农杆菌，得到共培养菌液，将步骤3得到的浮萍愈伤组织移至所述共培养菌液中，常温抽真空；

步骤7，避光缓慢振荡缓慢共培养，使质粒与愈伤组织充分结合；

步骤8，将共培养菌液吸出，将愈伤组织置于滤纸上待共培养菌液彻底被吸干后，将愈伤组织转移至固体共培养基上避光培养，提供愈伤组织恢复环境；

步骤9，用含头孢霉素的无菌水清洗步骤8得到的愈伤组织3-5次以洗去黏附在愈伤组织上未被完全裂解的农杆菌，将其放在滤纸上使愈伤组织中的水吸干，并烘干，移至筛选培养基上培养5-6天；

步骤10，将愈伤组织移至再生培养基上培养20-30天，使愈伤组织再生成浮萍，即可得到神经递质谷氨酸探针浮萍。