[发明专利]一种复合生物保鲜剂及其制备方法、使用方法和应用

说明书

本发明提供了一种复合生物保鲜剂，由枯草芽孢杆菌和贝莱斯芽孢杆菌的菌液或菌粉复配而成；其中枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)NBL‑B12005，其生物保藏号为：CCTCC NO:M 2021642；本发明还提供复合生物保鲜剂的制备方法、使用方法及在果蔬保鲜方面的应用。该复合生物保鲜剂在果实采摘前进行喷施，可有效减少果实生长期病害的发生，减少贮藏期果实质量损失率和降低了果实腐烂率，室温条件下草莓果实贮藏期可延长2‑3d，结合4℃冷藏，能更好的保持果实色泽和品质，草莓和桃等的贮藏期可延长5‑20d；本发明菌剂能进一步减少化学杀菌剂的使用。

技术领域

本发明属于水果生物保鲜技术领域，具体涉及一种复合生物保鲜剂及其制备方法、使用方法和应用。

背景技术

我国是农业大国，水果种植范围广泛、面积大。水果的储存保鲜问题是提高农业生产效率的重要影响因素之一，储存过程中，由于植物致病细菌和致病真菌引起的病害所造成的损失严重影响了产品的产量，损失率达10-50％，特殊情况下甚至达到60-80％。水果由于水分含量高，贮藏保鲜比较困难，容易腐烂变质，失去原有的口感、风味，尤其在炎热的夏季，更加难以保存。

目前市场上水果的保鲜技术仍旧采用传统方法，如冷藏、气调、紫外照射等物理方法以及使用各类广谱化学杀菌剂，且多用于采摘后；化学杀菌剂的使用虽然防腐效果较好，但具有许多负面影响，如产生毒素、引发过敏反应、污染环境、提高植物病原菌的抗药性，甚至会影响舌尖上的安全，很多有效的杀菌剂被限制使用。随着人们对自身健康和环境的重视，市场需要安全、高效、绿色、安全的水果保鲜剂和保鲜方法。因此，开发新型安全无毒的防腐保鲜技术迫在眉睫。

针对目前水果保鲜技术存在的问题，在水果的储存过程中，可以使用微生物制剂作为农产品保护的替代手段，微生物制剂主要由对植物病原真菌和病原细菌有拮抗作用的微生物构成。应用研究证明，以枯草芽孢杆菌属为基础的微生物制剂效果良好，其产生的各种次级代谢产物(抗生素、酶、色素、植物激素等)对各种不利的环境因素具有良好的抵抗力。

但是，发明人发现，利用单一的拮抗菌株防腐保鲜具有效果不稳定、防治谱较窄等缺点，且果实保鲜技术大都集中在果实采摘后，使用浓度高(拮抗菌悬液的浓度一般在10⁸CFU/ml 以上使用)生产成本高且效果有限。发明专利201410590184.1中将生物保鲜剂采前浸果和采后浸泡的方式进行梨果实的保鲜，实际使用中不易操作实现。

发明内容

针对上述研究背景，本发明提供一种复合生物保鲜剂及其制备方法、使用方法和应用，本发明将枯草芽孢杆菌和贝莱斯芽孢杆菌联合低浓度使用，可有效抑制引起水果腐败的多种致病菌，具有广谱抑菌性且效果稳定、安全高效等优点；另外，采前喷施，操作简便，可减少生长期水果病害的发生，提高抗病性，同时抑制贮藏期腐败病原菌侵染果蔬，减少果蔬的发病及腐烂率，从而延长其保鲜贮藏期，并减少化学抑菌剂的使用，在果蔬保鲜方面具有良好的应用价值。

为了实现上述技术效果，本发明提供以下技术方案：

本发明的第一个目的是提供一种一种复合生物保鲜剂，由枯草芽孢杆菌和贝莱斯芽孢杆菌的菌液或菌粉复配而成；所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis) NBL-B12005；该菌株分离自山东省肥城市中央桃行的桃果实样品，其菌落形态满足芽孢杆菌特征，经基因组测序比对，与其他已知同属的芽孢杆菌的16S rDNA序列有98％的相似性，通过基质辅助激光解吸电离飞行时间MALDI-TOF MS质谱分析，本发明菌株与Bacillus subtilis 准确率达2.201。综合形态特征、16S rDNA基因序列结果和MALDI-TOF MS质谱分析确定，本发明菌株属于枯草芽孢杆菌，命名为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)NBL-B12005。该菌株已于2021年05月31日保藏于中国典型培养物保藏中心，简称CCTCC，保藏地址：中国武汉武汉大学，其生物保藏号为：CCTCC NO: M 2021642。