[发明专利]一种用于区分三种猪链球菌血清型的复合PCR分型试剂盒及其应用

说明书

本发明属于生物技术技术领域，具体涉及一种用于区分三种猪链球菌血清型的复合PCR分型试剂盒及其应用。所述的试剂盒包含引物组；所述的引物组为：P1:TGATAGTGATTTGTCGGGAGGG、P2:GAGTATCTAAAGAATGCCTATTG；P3:AGCTCTAACACGAAATAAGGC、P4:GTCAAACACCCTGGATAGCCG；和P5:TTGGTGAGATTAAATCTAGAAAAG、P6:AGCCCTTATTGTCCTCAAAT；所述复合PCR分型试剂盒用于区分2型、7型和马链球菌兽疫亚种三种猪链球菌血清型具有很高的准确性，特异性好，灵敏度达pg级。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于区分三种猪链球菌血清型的复合PCR分型试剂盒及其应用。

背景技术

猪链球菌病是由多种猪源的致病性链球菌引起的一种细菌性传染病，其最主要致病菌为猪链球菌。猪链球菌可感染猪和人，导致急性出血性败血症、脑膜炎、肺炎、关节炎等，发病率和死亡率高，不仅给养猪业造成巨大的经济损失，也对人类的生命安全构成威胁。根据荚膜多糖的差异可将猪链球菌分为35种血清型，其中猪链球菌2型被认为是分布最广、致病性最强的一种血清型。

近年来，随着集约化猪场的快速发展，猪链球菌病的发病率和死亡率有逐年上升趋势，并且已经在我国大部分地区流行开来。因此，建立快速、简单的猪链球菌分型方法，尽早检测猪链球菌对于该菌的预防和控制尤为重要。根据文献报道，在中国，目前已发现并分离到的血清型有35种，主要流行血清型有2型、7型和马链球菌兽疫亚种。

常见的猪链球菌分型方法主要有血清学和基因分型两种方法。血清学分型方法主要有补体结合、间接血凝、乳胶凝集及ELISA等。但因为操作繁琐、周期长、或敏感性低、特异性差等不能满足临床检测的需求。目前，猪场的猪链球菌主要流行血清型有2型、7型和马链球菌兽疫亚种，因此迫切需要一种高度特异、敏感和简便的方法对感染猪链球菌的样品进行分型。本复合PCR分型试剂盒所选引物特异性好，无同源序列，不会产生假阳性，而退火温度为56℃以保证引物同目的序列有效退火，不会产生假阴性。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，目的在于提供一种用于区分三种猪链球菌血清型的复合PCR分型试剂盒，所述的试剂盒包含引物组；所述的引物组为SEQ ID NO：1～6所示。

本发明的另一个目的在于提供一种用于区分三种猪链球菌血清型的复合PCR分型试剂盒的应用。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：

一种用于区分三种猪链球菌血清型的复合PCR分型试剂盒，所述的试剂盒包含引物组；所述的引物组为：

P1:TGATAGTGATTTGTCGGGAGGG、P2:GAGTATCTAAAGAATGCCTATTG；

P3:AGCTCTAACACGAAATAAGGC、P4:GTCAAACACCCTGGATAGCCG；

和P5:TTGGTGAGATTAAATCTAGAAAAG、P6:AGCCCTTATTGTCCTCAAAT；

所述的猪链球菌为：猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2，SS2)、猪链球菌7型(Streptococcus suis serotype 7，SS7)和/或马链球菌兽疫亚种(Streptococcusequi subsp.Zooepidemicus，SEZ)。

利用上述引物，对待测菌株的DNA进行扩增，扩增出252bp则为7型猪链球菌，扩增出557bp则为2型猪链球菌，扩增出1045bp则为马链球菌兽疫亚种。

上述引物组可用于制备猪链球菌血清型的检测试剂盒。

与现有技术相比，本发明具有以下优点和效果：