[发明专利]一种骨髓间充质干细胞的培养基及培养方法

说明书

本发明涉及干细胞培养技术领域，尤其涉及一种骨髓间充质干细胞的培养基及培养方法。利用该培养基包括EliteGro‑Adv、左旋谷氨酰胺、重组人EGF和基础培养基。利用该培养基分离培养的老年人骨髓间充质干细胞具有纯度高、活性强等特点，与从年轻人骨髓中获得的骨髓间充质干细胞相比，在免疫表型、细胞倍增时间、细胞活性等方面没有显著差异，与传统培养方法相比，显著提高了细胞增殖速度。经检测合格可用于临床研究，或冻存待使用时复苏培养。

技术领域

本发明涉及干细胞培养技术领域，尤其涉及一种骨髓间充质干细胞的培养基及培养方法。

背景技术

骨髓(bone marrow)存在于骨松质腔隙和长骨骨髓腔内，由多种类型的细胞和网状结缔组织构成，根据其结构不同分为红骨髓(redbone mar-row)和黄骨髓(yellowbonemarrow)。红骨髓是人体的造血器官，分布于骨髓腔内，它主要是由血窦和造血组织构成。初生时期，骨内充满的全部是红骨髓，具有活跃的造血功能。成年后，红骨髓主要存在于一些扁骨、不规则骨和长骨的骨骺内，以椎骨、胸骨和髂骨处最为丰富，造血功能也最为活跃。

除造血功能之外，红骨髓还有防御、免疫和创伤修复等多种功能。其创伤修复功能主要缘于其中的骨髓间充质干细胞(BMSC)，它们保留着向成纤维细胞、成骨细胞分化的潜能。一些学者利用红骨髓培养的骨髓间充质干细胞植入骨折及骨缺损处，证实它们可促进骨组织形成，有利于骨折的愈合和缺损的修复。

骨髓间充质干细胞(BMSC)，是一类起源于中胚层的成体干细胞，具有自我更新及多向分化潜能,可分化为多种间质组织,如骨骼、软骨、脂肪、骨髓造血组织等，是一种理想的间充质干细胞(mcscnchymal stem cells,MSC)临床研究及应用的来源。

由于心脑血管疾病和退行性疾病好发于老年人，BMSCs自体移植在防治这些与衰老相关疾病方面具有极广阔的应用前景。然而现有的分离培养方法对老年人BMSCs的分离培养效果不够理想，获得的细胞纯度和活力较低，影响了BMSCs对中老年人疾病的治疗。因此，急需提供一种适用于中老年人BMSCs体外培养的培养基及培养方法，以提高BMSCs的细胞活力，用于治疗老年患者的心脑血管疾病和退行性疾病等疾病。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种骨髓间充质干细胞的培养基及培养方法。利用该培养基培养获得的骨髓间充质干细胞纯度高、活力好、细胞增殖速度快。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供骨髓间充质干细胞的培养基，包括：EliteGro-Adv、左旋谷氨酰胺、重组人EGF和基础培养基。

EliteGro-Adv是不含动物血清，非异种细胞培养补充剂，提供丰富的人源生长因子和细胞因子，可作为FBS(胎牛血清)的有效替代品，以支持细胞扩增。

一些实施方案中，本发明培养基包括基础培养基和如下浓度的组分：

EliteGro-Adv 5vol％，左旋谷氨酰胺2mmol/L，重组人EGF 10ug/L。

一些具体实施例中，本发明培养基包括基础培养基和如下浓度的组分：

EliteGro-Adv 5vol％，左旋谷氨酰胺2mmol/L，重组人EGF 10ug/L。

一些实施方案中，所述基础培养基为DMEM-LG培养基。

本发明还提供一种骨髓间充质干细胞的分离培养方法，包括：

将骨髓单细胞悬液经密度梯度离心，收集含单个核细胞的上清液；

将上清液离心重悬后经免疫磁珠分离，获得骨髓间充质干细胞；

将所述骨髓间充质干细胞接种至本发明所述的培养基中依次进行原代培养和传代培养。