[发明专利]一种骨髓间充质干细胞的培养基及培养方法在审
申请号: | 202110691899.6 | 申请日: | 2021-06-22 |
公开(公告)号: | CN113201492A | 公开(公告)日: | 2021-08-03 |
发明(设计)人: | 杨美中;路建伟;胡晓川 | 申请(专利权)人: | 浙江三誉生物科技有限公司 |
主分类号: | C12N5/0775 | 分类号: | C12N5/0775 |
代理公司: | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人: | 王欢 |
地址: | 321000 浙江省金华市婺城区*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 骨髓 间充质 干细胞 培养基 培养 方法 | ||
1.一种骨髓间充质干细胞的培养基,其特征在于,包括:EliteGro-Adv、左旋谷氨酰胺、重组人EGF和基础培养基。
2.根据权利要求1所述的培养基,其特征在于,包括基础培养基和如下浓度的组分:
EliteGro-Adv5vol%,左旋谷氨酰胺2mmol/L,重组人EGF10ug/L。
3.根据权利要求1所述的培养基,其特征在于,包括基础培养基和如下浓度的组分:
EliteGro-Adv5vol%,左旋谷氨酰胺2mmol/L,重组人EGF10ug/L。
4.根据权利要求1~3任一项所述的培养基,其特征在于,所述基础培养基为DMEM-LG培养基。
5.一种骨髓间充质干细胞的分离培养方法,其特征在于,包括:
将骨髓单细胞悬液经密度梯度离心,收集含单个核细胞的上清液;
将上清液离心重悬后经免疫磁珠分离,获得骨髓间充质干细胞;
将所述骨髓间充质干细胞接种至权利要求1~4任一项所述的培养基中依次进行原代培养和传代培养。
6.根据权利要求5所述的分离培养方法,其特征在于,所述密度梯度离心为使用Percoll分离液900g离心30min,所述Percoll分离液的密度为1.073g/ml。
7.根据权利要求5所述的分离培养方法,其特征在于,所述骨髓单细胞悬液和所述Percoll分离液的体积比为l:2。
8.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述免疫磁珠分离的抗体为CD45抗体。
9.根据权利要求5所述的分离培养方法,其特征在于,所述接种的密度为1×104/ml。
10.根据权利要求5所述的分离培养方法,其特征在于,所述原代培养和传代培养为5%CO2、37℃恒温培养;所述原代培养和继代培养的过程中每2~5天换液一次。
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