[发明专利]一种铁粒幼红细胞性贫血检测引物组合物及应用

说明书

本发明提供了一种用于检测铁粒幼红细胞性贫血基因的引物组合物及其应用，涉及分子生物学技术领域。利用本发明提供的与SA相关基因突变的基因群，结合高通量测序技术，可一次性检测所述2个基因的342个基因突变位点，覆盖面广，检测效率高，具有操作简便、精确度、准确性、灵敏度高等优点，解决了目前检测准确性低、检测方法局限的技术缺陷，同时可实现在骨髓形态学和血常规检查之外对SA进行辅助诊断，特别是对于疾病后续的治疗方向和效果做出预判具有特殊的优势，可弥补临床SA在分子诊断、疾病演变、治疗、预后、用药等指导方面的不足。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种用于检测铁粒幼红细胞性贫血基因的引物组合物及其应用。

背景技术

铁粒幼红细胞贫血(sideroblastic anemia，SA)是由不同病因引起的血红素合成障碍和铁利用不良所致的一组罕见的异质性疾病，其共同特征为骨髓中出现大量环形铁粒幼细胞、红系无效造血、组织铁增高和外周血出现不同比例低色素性红细胞。铁粒幼细胞贫血可分为遗传性和获得性两类，不同类型的SA治疗策略和转归存在差异。遗传性铁粒幼红细胞贫血多为X染色体性联遗传，患者贫血程度差别很大，有些轻度贫血者不做家系调查极易漏诊，应用药理剂量的吡多醇治疗ALAS2导致的遗传性SA部分患者可获益。获得性铁粒幼细胞贫血可近一步分为原发性和继发性。继发性铁粒幼细胞贫血可由于服用药物、饮酒和铅、锌等中毒所致。原发性铁粒幼贫血主要包括骨髓增生异常综合征伴环形铁粒幼细胞(Myelodysplastic syndrome with ring sideroblasts，MDS-RS)等，该疾病可进展为急性白血病。偶见有明显家族性发病的铁粒幼细胞贫血患者出现骨髓增生异常综合征的情况。铁过多是SA常见的并发症，尤其在疾病晚期，严重者可危及生命导致死亡。此外，还可见肝脾肿大、糖尿病、皮肤色素沉着、心律失常、免疫功能低下等并发症。

目前，对SA的诊断尚无明确诊断指南参考，其临床表现及实验室检查项目缺乏特异性。患者有明确的家族史有助于遗传性SA的诊断。遗传性SA发病年龄轻，除少数典型病例于出生后或婴儿时期出现贫血，大多数患者于10-20岁左右出现贫血，偶有至50-60岁后才被发现；遗传性SA常见为小细胞低色素性贫血，偶有大细胞性贫血；同时，遗传性SA患者血清含铁更高。因此，患者发病年龄、贫血性质、铁代谢等指标对于遗传性SA的诊断有重要的提示意义。由于骨髓铁染色均表现有大量环形铁粒幼细胞，年龄、小细胞或大细胞贫血、铁代谢等指标均不具有明确的特异性，临床上较难鉴别遗传性SA和获得性SA尤其是MDS-RS。而基因突变分析是遗传性SA诊断的重要标准，目前可检测出30-70％的遗传性SA患者。

目前检测SA的方法主要涉及血常规、细胞形态及分子生物学等。其中分子生物学的实验方法主要有巢式PCR、一代测序等。PCR方法不能直观的得到具体的突变序列，而一代测序的方法受到测序通量的影响，无法一次性检测多个基因的全部外显子区域。而二代测序作为一种高通量的检测方法，可以一次性准确测量多个基因的外显子序列，使精准治疗成为可能。目前对于SA在应用二代测序的方法进行基因检测鉴别方面的研究屈指可数，而SA在基因诊断水平的检测尤为重要。

专利CN108192880A公开了一种人的δ-氨基酮戊酸合成酶突变蛋白及其应用，根据该δ-氨基酮戊酸合成酶突变蛋白制备基因芯片、单克隆抗体和ELISA试剂盒，为X连锁遗传性铁粒幼细胞贫血和X连锁红细胞生成性血卟啉病的基因诊断提供指引作用，但所述方法仅针对人的δ-氨基酮戊酸合成酶突变蛋白，其检出率较低。

因此，亟需一种精确度、准确性更高的SA检测试剂盒及方法，以弥补临床SA在分子诊断、疾病演变、治疗、预后、用药等指导方面的不足。

发明内容

针对上述不足，本发明提供了一种用于检测铁粒幼红细胞贫血基因的引物组合物及其应用。采用本发明所述的引物组合物，检测铁粒幼红细胞贫血相关基因，具有操作简便、精确度、准确性、灵敏度高的优点，可弥补临床SA在分子诊断、疾病演变、治疗、预后、用药等指导方面的不足。

为了实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：