[发明专利]一种在果树组织内获取葡萄座腔菌分生孢子器的方法

权利要求书

1.一种在果树组织内获取葡萄座腔菌分生孢子器的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、采集果树枝条并消毒，在所述枝条上针刺获得伤口，将葡萄座腔菌接种至所述伤口处；

S2、接种后的所述枝条水平放置在接种盘中，表面喷无菌水，用保鲜膜覆盖，保鲜膜表面扎孔透气，将所述接种盘置于培养箱中培养至接种的所述葡萄座腔菌长出新的气生菌丝并伸入伤口不易脱落；

S3、将所述枝条转移至装有无菌水的容器中，继续在培养箱中培养，直至观察到所述枝条病斑部位着生黑色粒点；

S4、切取着生黑色粒点处枝条的韧皮组织，FAA固定液固定24h以上，做石蜡切片，使用苯胺蓝染色，即可观察到分生孢子器与分生孢子。

2.根据权利要求1所述的一种在果树组织内获取葡萄座腔菌分生孢子器的方法，其特征在于，所述果树为桃树、李子树、杏树、樱桃树、猕猴桃树或苹果树中的任一种。

3.根据权利要求2所述的一种在果树组织内获取葡萄座腔菌分生孢子器的方法，其特征在于，所述枝条为当年生健康枝条，直径为5-6mm，采样时间为6-8月份。

4.根据权利要求3所述的一种在果树组织内获取葡萄座腔菌分生孢子器的方法，其特征在于，所述步骤S1中将所述枝条的下端三分之一去除，在剩下所述枝条上用无菌针针刺4针，使得伤口呈“井”字形，相邻两针的间距为3-5mm。

5.根据权利要求1所述的一种在果树组织内获取葡萄座腔菌分生孢子器的方法，其特征在于，葡萄座腔菌培养后，用打孔器打直径为5mm的菌饼，将所述菌饼覆盖在针刺伤口上，菌丝一面与所述枝条接触，按压使得菌丝与所述枝条接触紧密。

6.根据权利要求5所述的一种在果树组织内获取葡萄座腔菌分生孢子器的方法，其特征在于，所述葡萄座腔菌的培养方法为：将所述葡萄座腔菌活化后用无菌打孔器打菌饼，并将所述菌饼转移至新鲜无菌的PDA培养基平板上，26-28℃，12h/12h光照与黑暗交替培养5-7d。

7.根据权利要求1所述的一种在果树组织内获取葡萄座腔菌分生孢子器的方法，其特征在于，所述步骤S2和S3中，接种后在培养箱培养的条件为：温度为26-28℃，相对湿度为95％，12h/12h光照与黑暗交替。

8.根据权利要求1所述一种在果树组织内获取葡萄座腔菌分生孢子器的方法，其特征在于，所述步骤S2中培养的时间为12-24h。

9.根据权利要求1所述的一种在果树组织内获取葡萄座腔菌分生孢子器的方法，其特征在于，所述步骤S3中培养的时间为14-21d，每隔1d在所述枝条表面喷无菌水保湿。