[发明专利]一种具有抗肿瘤活性的GalNAc/CpG脂质体疫苗、制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种具有抗肿瘤活性的GalNAc/CpG脂质体疫苗、制备方法及应用。该疫苗包含Tn抗原GalNAc，胆固醇和核酸佐剂CpG ODN。本发明通过Click反应构建Chol‑GalNAc复合物，该疫苗组分可以清晰表征，同时具有生物可降解特性。通过薄膜‑超声方法构建包载佐剂CpG ODN的脂质体疫苗，可实现体液和细胞免疫的抗肿瘤活性的目的，在制备抗乳腺癌等药物中作为主要活性成分发挥作用。实验证明，本发明的GalNAc/CpG脂质体疫苗具有良好的粒径，可以很好地诱导小鼠骨髓来源BMDCs和脾脏B细胞的成熟，诱导小鼠产生特异性抗体，同时可有效地激活小鼠的细胞免疫，实现抗肿瘤效果。

技术领域

本发明属于生物制药技术领域，具体涉及一种具有抗肿瘤活性的糖脂质体疫苗，更具体的，本发明涉及一种具有抗肿瘤活性的GalNAc/CpG脂质体疫苗、制备方法及应用。

背景技术

肿瘤疫苗(cancer vaccine)是利用肿瘤相关抗原和免疫佐剂的激活功能，刺激机体产生特异性针对肿瘤的免疫应答，进而有效地杀伤肿瘤，是肿瘤免疫治疗领域有前景的策略。肿瘤相关糖抗原(Tumor associated carbohydrate antigens，TACAs)来自于肿瘤细胞表面的糖萼结构，是由于细胞在癌变的过程中，糖基转移酶及糖苷酶的功能受限，造成糖蛋白和糖脂等糖缀合物中糖基的改变所形成的变异糖分子，包括以糖蛋白形式存在的连接在丝氨酸或苏氨酸残基上的Tn、TF、sTn抗原，以及以糖脂形式存在的神经节苷脂、globo类抗原等。TACAs区别于蛋白质抗原的优势在于其结构简单，易于修饰，生物相容性好，代谢产物安全无毒。因此，近年来基于TACAs的肿瘤疫苗研究一直是研究的热点。然而，大部分TACAs是T细胞非依赖的抗原，不能直接结合主要组织相容性复合物MHC去激活T细胞。更重要的是，没有T细胞帮助，单独的TACAs只能很弱地激活B细胞产生低抗体滴度的IgM。

目前基于TACAs肿瘤疫苗的研究存在较多局限。TACAs具有很强的亲水性，因此许多研究通常将碳水化合物抗原与增强抗原呈递的免疫活性蛋白或肽载体连接一起。然而，蛋白质或多肽载体本身可引起强免疫力并因此抑制对糖抗原的免疫应答，同时疫苗载体合成步骤复杂，疫苗组分难以定性的问题亟待解决，因此在其临床应用中仍然有很大的限制。

免疫佐剂(immune adjuvant)是肿瘤疫苗不可或缺的组分，将其和肿瘤抗原联合使用，通过激活固有免疫系统，能够增强免疫应答的强度或改变免疫应答的方式。免疫佐剂激活固有免疫系统主要通过模式识别受体，例如Toll样受体(TLRs)和C-型凝集素受体(CLRs)等。CpG寡脱氧核苷酸(CpG oligodeoxynucleotide，CpG ODN)是TLR9激动剂，一般由20个左右的核苷酸组成，序列中含CG碱基序列。CpG ODN的免疫学功能非常多样化，不但能够激活固有免疫抵抗病原体感染，还能够增强Th1免疫应答减缓过敏性疾病。此外，CpG ODN还能够显著地刺激B细胞产生抗体，增强杀伤性T细胞和NK细胞的抗肿瘤能力，因此在肿瘤疫苗和免疫治疗中具有重要的地位。

近年来，随着纳米科学的发展，纳米材料逐渐成为肿瘤疫苗研发的重要方向。鉴于大分子组装体在调控材料结构与性能方面的优势，以及在小分子药物、基因装载与控释方面取得的成就，利用自组装手段构建新型肿瘤疫苗成为研究的热点领域。

相关的研究表明，基于TACAs的肿瘤疫苗能够显著地诱导机体产生多种免疫保护机制，不局限于特异性抗体，还包括针对肿瘤的T细胞免疫应答。

发明内容

本发明目的在于提供一种具有较好抗肿瘤活性的肿瘤相关糖抗原Tn的脂质体疫苗，针对于蛋白质或多肽载体的免疫力，利用Tn抗原(GalNAc)修饰的胆固醇材料，通过薄膜-超声的方法构建了内部包载CpG ODN免疫佐剂的脂质体疫苗，本发明的目的在于提供一种功能性糖纳米疫苗，并同时从体液免疫和细胞免疫两个方面评估了该脂质体疫苗的抗肿瘤功能，希望为基于TACAs肿瘤疫苗的研发提供新的研究思路。