[发明专利]一种炎症检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种炎症检测试剂盒。本发明筛选获得特异性识别艰难梭菌GDH抗原单克隆抗体，将所述单克隆抗体标记量子点和其他抗体标记的硝酸纤维素膜制备获得抗体荧光量子点快速检测试纸，同时针对艰难梭菌毒素B的DNA序列进行分析，选取保守区设计RPA引物和探针，并制备成为相应的检测试纸条；将两个检测方法进行组合使用，能够进一步提高检测的准确性，从而及早诊断，利于患者尽快治疗，适于大规模推广使用。

技术领域

本发明涉及生物检测领域,并且更具体地涉及一种炎症检测试剂盒。

背景技术

艰难梭菌(Clostridium difficile，CD)，又称难辨梭状芽孢杆菌或难辨梭菌，是一种可形成孢子的、厌氧的革兰氏阳性杆菌，存在于环境、动物及人类的肠道中。1935年Holl等首次在健康新生儿大便中分离出该菌，并命名为难辨杆菌(Bacillus difficilis)，以反映其培养的难度之大。1978年，Larson等和Bartlett等确认艰难梭菌是伪膜性肠炎的致病菌，且毒素的存在与致病性相关。目前，艰难梭菌已是发达国家医院感染性腹泻的主要病原菌。艰难梭菌侵入人体后，机体免疫系统与菌株毒力相互作用，其临床表现可有无症状携带、轻度到重度腹泻、结肠炎、伪膜性肠炎、肠梗阻、中毒性巨结肠和暴发性肠炎合并穿孔等，甚至危及生命。因艰难梭菌导致的感染或腹泻被称为艰难梭菌感染(Clostridiumdifficile infection,CDI)或艰难梭菌相关性腹泻(Clostridium difficile-associateddiarrhea，CDAD)。

艰难梭菌包括两类，产毒株和非产毒株。其产毒株可产生以下三种毒素：毒素A(Toxigenic Clostridium difficile A，Tcd A)、毒素B(Toxigenic Clostridiumdifficile B，Tcd B)及二元毒素(binary toxin,CDT)。其中，毒素A与毒素B在艰难梭菌致病过程中影响最大，是主要致病因子。毒素A有肠毒性，以破坏肠道血管及黏膜为主，毒素B有细胞毒性，可进入肠上皮细胞，破坏细胞骨架肌动蛋白的形成从而引发临床症状。近些年大量临床研究显示，CDI患者可以只有毒素B的存在，当患者毒素A阴性而毒素B阳性时，其临床症状严重程度更高。

目前公认的诊断CDI的“金标准”是细胞毒性试验和产毒培养(toxigenicculture，TC)。细胞毒性试验因操作复杂，价格昂贵且花费时间较长，不适合临床实验室日常开展。产毒培养是在先行培养得到艰难梭菌培养物后，通过聚合酶链反应(Polymerasechain reaction，PCR)扩增毒素基因以便进一步确认分型，优势在于具有较高的特异性和敏感性，但艰难梭菌培养困难，花费时间长且需要高精尖仪器辅助。谷氨酸脱氢酶(Glutamate dehydrogenase,GDH)是艰难梭菌表面表达的抗原性蛋白，具有较高的稳定性和灵敏性，但是对菌株是否存在产毒性无区分能力，因而需要与其他方法联合应用。

GDH具有高敏感性，但存在假阳性及无法判断艰难梭菌中是否携帯有毒素基因的缺陷。而核酸检测可精确检测毒素基因分型，但大量样本进行基因检测花费巨大，周期长，需要高精尖仪器辅助，检测费用昂贵。因此，现有方法的临床敏感性不是十分理想。

发明内容

为了更好规避以上缺陷,为患者提供尽早、准确的诊断结果，提供了一种制备简单、成本低廉、使用方便、不需要高精尖仪器、更为准确、高效的检测试剂盒。所述试剂盒通过核酸-抗体双重检测方法对艰难梭菌进行检测，能更有效检测艰难梭菌及其基因分型(即是否携带毒素B基因),从而及早诊断，利于患者尽快治疗，并且避免过度治疗。

本发明提供以下技术方案：