[发明专利]一种具有分子开关的基因序列、质粒和免疫细胞

说明书

本发明公开了一种具有分子开关的基因序列、质粒和免疫细胞，属于分子生物技术领域，所述基因序列包括激发部件、连接区和应答部件，所述激发部件包括靶点结合区和转录调节区；所述应答部件包括表达区和与所述转录调节区相匹配的启动子区。激发部件的靶点结合区用于表达靶点结合受体，转录调节区用于表达转录调节因子，靶点结合受体用于与靶点结合后，转录调节因子从靶点结合受体上分离，转录调节因子结合到启动子区，并激活启动子，启动表达区中基因序列的表达；连接区将激发部件和应答部件连接在同一基因序列中，简化制备流程、提高转染的效率，利于工业化制备病毒颗粒和CAR细胞。

技术领域

本发明涉及分子生物技技术领域，具体涉及一种具有分子开关的基因序列、质粒和免疫细胞。

背景技术

随着全球环境因素的不断恶化，无论发达国家或发展中国家，恶性肿瘤的发病率和死亡率均呈上升趋势，恶性肿瘤已成为人类生命健康的最大危害。

嵌合抗原受体免疫细胞是一种杀伤肿瘤的新型精准靶向免疫细胞，近几年通过优化改良在肿瘤杀伤上取得很好的效果，是一种非常有前景的，精准、快速、高效的方式。嵌合抗原受体免疫细胞(CAR细胞)包括CAR-T、CAR-NK、CAR-B以及CAR-MP(CAR-macrophage，CAR-巨噬细胞)，是一种以嵌合型抗原受体(Chimeric Antigen Receptor,CAR)为基础的免疫细胞。通过体外基因转移技术，将编码特异的嵌合抗原受体的基因序列转导入免疫细胞，生成可以结合靶抗原的肿瘤特异性免疫细胞。

CAR-T细胞在治疗血液肿瘤已经取得显著的治疗效果，如治疗急性B淋巴母细胞白血病的Kymriah，治疗非何杰金氏淋巴瘤等血液病的Yescarta、Breyanzi和Tecartus，以及治疗多发性骨髓瘤的Abecma已获得FDA批准上市。但CAR细胞治疗实体瘤的治疗效果远不如血液病，进而研发进展缓慢。并且有不少CAR-T细胞治疗实体瘤在临床1/2期时因为毒性和/或有效性问题而终止试验。

主要原因有：实体瘤本身具有的特有特征微环境(Tumor Microenvironment，TME)；以及CAR-T自身的局限。迄今为止，现阶段的CAR细胞(包括CAR-T细胞)产品都是持续性地表达CAR分子，且没有组织特异性，不论CAR-T细胞是否在肿瘤组织区域CAR分子都表达。由此CAR-T细胞始终处于激活状态，CAR-T很容易衰竭失能(exhaustion、anergy)和持续性(persistence)差，并且由于没有组织特异性，on-target/off-tumor的副反应不可避免。

发明内容

针对现有技术中存在的上述技术问题，本发明提供一种具有分子开关的基因序列、质粒和免疫细胞，通过连接区将激发部件和应答部件连接在一段基因序列下，基因序列中的激发部件作为应答部件的分子开关，以调节应答部件的表达。

本发明公开了一种具有分子开关的基因序列，包括激发部件、连接区和应答部件，所述激发部件包括靶点结合区和转录调节区；所述应答部件包括表达区和与所述转录调节区相匹配的启动子区。

优选的，所述靶点结合区包括单链抗体，

所述转录调节区包括synNotch和Gal4VP64；

所述启动子区包括Gal4UAS，所述表达区包括蛋白分子表达序列；所述蛋白分子包括CAR326或anti-Her2 scFv；

所述连接区的连接序列包括多聚腺嘌呤核糖核苷酸位点序列，避免激发部件与应答部件间的干扰。

优选的，所述激发部件的基因序列为SEQ ID NO:2；

所述连接序列的基因序列为SEQ ID NO:5；

所述CAR326的基因序列为SEQ ID NO:4。

优选的，所述表达区包括第一蛋白表达序列、连接短肽序列和第二蛋白表达序列；