[发明专利]一种能够沉默S100A4基因的递送系统及其用途

说明书

本发明属于化学合成、生物化学、药剂学领域，具体涉及一种能够沉默S100A4基因的递送系统及其用途。本发明通过低pH敏感基团苯甲亚胺键连接PEG和PEI，合成肿瘤酸度敏感的PEG‑PEI共聚物，通过静电相互作用络合针对S100A4的siRNA，得到PEG‑PEI@siS100A4纳米复合物，以实现siRNA的高效靶向递送。不仅可以为肿瘤酸性微环境靶向纳米药物设计提供新策略，而且为肿瘤的基因治疗提供新思路。

技术领域

本发明属于化学合成、生物化学、药剂学领域，具体涉及一种能够沉默S100A4基因的递送系统及其用途。

背景技术

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种序列特异性的基因调控机制，由双链RNA(dsRNA)触发，通过内源性microRNA(miRNA)或人工合成的小干扰RNA(siRNA)等核酸分子来抑制基因的表达。RNA干扰已经成为癌症治疗的一种有效手段，可以抑制几乎任何基因。然而，裸露的siRNA分子量和体积大、不能有效穿透细胞膜、对核酶敏感、容易被肾脏快速清除、容易引起免疫原性和脱靶效应，严重阻碍了其在肿瘤治疗中的应用。

发明内容

本发明的目的之一，提供一种能够沉默S100A4基因的递送系统，所述递送系统为由PEG-PEI共聚物通过静电相互作用络合针对S100A4的siRNA，得到的PEG-PEI@siS100A4纳米复合物，所述PEG-PEI共聚物是通过低pH敏感基团苯甲亚胺键连接PEG和PEI而成，所述siRNA的序列如下：

5'-GGACAGAUGAAGCUGCUUUTT-3'。

进一步的，所述PEG-PEI共聚物由以下步骤制备而成：

S1、PEG与对甲酰苯甲酸反应生成PEG-CHO；

S2、PEG-CHO与PEI通过迈克尔加成反应生成PEG-PEI共聚物。

更进一步的，S1具体包括：

(1)将PEG和二氯甲烷按照8-10g:145-155mL的质量体积比混合、搅拌至PEG完全溶解，然后在溶液中依次加入对甲酰苯甲酸5-7g、DCC 8-8.5g、DMAP 1-1.2g，密封搅拌，反应20-24h；

(2)将步骤(1)中反应得到的溶液过滤直至滤液澄清，将滤液在38-40℃浓缩至有颗粒状样品出现；

(3)将浓缩得到的样品用异丙醇溶解，并将得到的溶液过滤至澄清，将滤液放置在冰水混合物中，过夜冷却重结晶，过滤得到晶体，将得到的晶体先用异丙醇洗涤，再用乙醚洗涤，如此重复操作3次；洗涤完成后，将晶体干燥至粉末状，即得到PEG-CHO。

更进一步的，S2具体包括：

将浓度为0.2g/mL的PEG-CHO水溶液和浓度为0.4g/mL的PEI水溶液按照1:1的体积比混合，搅拌反应2h，后将其用液氮速冻，之后冻干24h，即得PEG-PEI共聚物。

更进一步的，所述PEG-PEI@siS100A4纳米复合物具体由以下步骤制备：将PEG-PEI共聚物制成1mg/mL的PEG-PEI溶液后，将PEG-PEI共聚物与siRNA按照N/P为3-7.5:1的比例络合，室温下孵育30min，制得所述递送系统。

本发明的目的之二，提供所述的一种能够沉默S100A4基因的递送系统在制备治疗癌症的药物中的用途。

进一步的，所述癌症为人卵巢癌。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：