[发明专利]一种快速定量分析药食两用真菌混合发酵液的方法

说明书

本发明公开了一种快速定量分析药食两用真菌混合发酵液的方法，涉及微生物混合培养中不同菌种生物量统计分析技术领域，具体为一种快速定量分析药食两用真菌混合发酵液的方法，具体包括以下步骤：(1)首先采用完全一致的固体培养基成分、固体培养基制备方法和培养条件获得不同药食用真菌的单菌落；(2)基于图像识别分析软件分别建立不同食用菌单菌落的识别标准和模式；(3)制备药食用真菌混合发酵培养液。本发明的有益效果是能够对混合培养的微生物进行相对精确的生物量定量分析，将稀释平板法和图像处理软件相结合，能比较高效地完成食用菌混合培养中生物量的定量分析。

技术领域

本发明涉及微生物混合培养中不同菌种生物量统计分析技术领域，具体为一种快速定量分析药食两用真菌混合发酵液的方法。

背景技术

在各种微生物培养过程中生物量是重要的生物学参数，能够表征微生物生长优劣状况。在微生物纯种培养中，常用的生物量测定方法有光密度法、体积法(PMV)、稀释涂布平板法、血球计数板法、氨基葡萄糖法和DNA生物法等，除此之外，有光谱法用于在线生物量的测定，例如专利CN109668858A公开了一种基于近红外光谱检测发酵过程生物量和组分浓度的方法；也有采用金属离子间接法测定生物量，例如专利CN108663361B公开了一种快速测定液态发酵液中生物量的方法，该方法基于酶标仪以铬黑T双波长显色法对菌体胞内的镁离子进行测定，通过镁离子的含量来反应菌体生物量。而对于混合微生物共培养体系中生物量的测定则要麻烦许多，可以采用的方法有稀释涂布平板和qPCR法，例如专利CN108588188A公开了一种混合微生物发酵过程中微生物定量检测方法，该发明对PMA-qPCR方法进行了改进，开发了一种修复亚致死菌体细胞膜的修复液，减少了菌体亚致死损伤带来的假阴性，提高了定量的准确性。但上述方法都比较繁琐，前者需要稀释涂布一系列平板，并进行单菌落计数和统计，后者则需要设计特异性引物，并需要购置较为昂贵的定量PCR试剂盒。因此，发明一种快捷的混合微生物培养中生物量定量分析方法十分必要。

发明内容

本发明针对药食用真菌混合培养开发了一种将稀释涂布平板法和图像定量分析相结合的生物量计数方法，具有既简便又相对准确度特点，特别适用于多种微生物共培养的固体或液体培养中生物量的统计分析。

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种快速定量分析药食两用真菌混合发酵液的方法，具体包括以下步骤：

(1)首先采用完全一致的固体培养基成分、固体培养基制备方法和培养条件获得不同药食用真菌的单菌落；

(2)基于图像识别分析软件分别建立不同食用菌单菌落的识别标准和模式；

(3)制备药食用真菌混合发酵培养液；

(4)对混合发酵液取样并进行适当的稀释后，按照步骤(1)所述方法制得不同菌株的单菌落；

(5)采用已建立的菌落图像识别标准，识别并计数不同品种单菌落，经计算获得不同药食用真菌的生物量。

可选的，所述步骤(1)中所用固体培养基可以是PDA、察氏培养基、改良察氏培养基、马丁培养基、改良马丁培养基、松叶培养基中的任何一种，优选地是PDA培养基、马丁培养基和松叶培养基中的一种。

可选的，所述步骤(1)中所涉及的混合药食用真菌可以是灵芝、虫草、金耳、猴头菇、香菇、蜜环菌、灰树花中的任何两种及两种以上混合培养。

可选的，所述步骤(2)中所用的图像识别软件可以是Photoshop、Matlab、ilastik、ImageJ、HToup-View中的任何一种。

本发明提供了一种快速定量分析药食两用真菌混合发酵液的方法，具备以下有益效果：

本发明的有益效果是能够对混合培养的微生物进行相对精确的生物量定量分析，将稀释平板法和图像处理软件相结合，能比较高效地完成食用菌混合培养中生物量的定量分析。

具体实施方式