[发明专利]一种荧光微球、荧光探针和检测四环素的方法

说明书

本发明涉及四环素的检测技术，特别是指一种荧光增强型检测四环素(TC)的方法和应用。以姜黄素(Cur)为靶标六氯环三磷腈(HCCP)为连接基团形成聚环三磷腈共姜黄素(PC)荧光微球。并且基于荧光微球与Mg(II)络合形成的PC‑Mg(II)荧光探针，可实现对四环素的检测。在DMSO:H₂O溶液体系中，利用四环素与Mg(II)的络合形成PC‑Mg(II)‑TC三元体系，使得溶液体系荧光显著增强，从而实现对四环素的检测。本发明可在10s内实现对四环素的快速响应，系统出现明显的荧光增强现象，对四环素的最低检出限低至50nM，具有较高的灵敏性、较强的抗干扰能力、识别快速、检测结果准确。基于荧光探针PC‑Mg(II)制备的可视化的试纸条，可实现对四环素的快速检测，检测过程简便，具有开发使用前景。

技术领域

本发明涉及四环素的检测技术，特别是指一种荧光微球和荧光探针及检测四环素的方法。

背景技术

四环素类抗生素(TCs)由于其广谱性，稳定性和低成本，被广泛用于动物饲料中，以增加动物体重和治疗细菌感染。随着对环境和人类健康的关注度持续上升，四环素类药物在动物源食品中的滥用受到各国的严格监管。如，对肉蛋类食品的严格检测要求大大提高了食品的安全性。现在常用的检测方法有酶联免疫吸附法，高效液相色谱法(HPLC)，液相色谱-串联质谱法(LC-MS)，毛细管电泳-质谱法(CE-MS)。另一方面，由于各国农业发展的不均衡性，在许多地区对食品源头的监管仍面临巨大挑战。特别是，养殖场的日常抽样检测以及对养殖场废水产生的环境污染的有效监管仍需要更加便捷的检测方法。典型的HPLC，LC-MS，CE-MS分析技术通常需要大型的仪器，复杂的样品预处理或熟练的分析技术人员。因此，(在线)光谱技术，如紫外光谱，荧光和近红外光谱等日益受到青睐。在这几种分析技术中，荧光探针技术可以通过制备廉价的试剂盒实现在复杂的背景下的视觉识别，是最有潜力成为在广大农业地区域推广的快速分析技术。

近年来，应用于四环素检测的荧光探针得到了一定的发展。出现了基于小分子，纳米材料，聚合物等TCs检测荧光探针。实现了对真实样品(如城市河水)的荧光检测。然而，大多数荧光探针表现出一些缺点，例如响应时间慢和灵敏度差。因此，开发具有快速响应和高灵敏度的新型荧光探针仍然是巨大的挑战。

发明内容

本发明旨在提供一种荧光微球、荧光探针及其检测四环素的应用和方法，解决了快速检测四环素，尤其是自来水和环境污水中四环素的问题。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种荧光微球，是姜黄素与六氯环三磷腈形成的共聚物PC。

姜黄素的羟基与六氯环三磷腈的氯缩合，形成共聚物。

荧光微球的粒径为0.5-2微米。

上述荧光微球的制备方法包括以下步骤：

(1)环三磷腈和姜黄素溶于有机溶剂；

(2)加入三乙胺，反应4-12小时。

步骤(1)的有机溶剂为乙腈、甲苯、四氢呋喃或DMF，优选为乙腈。

步骤(1)中，六氯环三磷腈与姜黄素的摩尔比为1:1.5-5，优选为1:2-4，在本发明的优选方式中，六氯环三磷腈与姜黄素的摩尔比为1:3。

步骤(2)中，六氯环三磷腈摩尔比为1:50-150，优选为1:80-100，在本发明的优选方式中，六氯环三磷腈与三乙胺的摩尔比为1:90。

步骤(2)反应结束后取沉淀(离心或过滤、抽滤)，用水和乙醇洗涤并干燥。

一种用于检测四环素的荧光探针，为上述荧光微球与镁离子的混合物。