[发明专利]一种低成本多能干细胞分化造血干细胞的培养基及培养方法

说明书

本发明涉及一种低成本多能干细胞分化造血干细胞的培养基，包括第一阶段培养基和第二阶段培养基；所述第一阶段培养基包括DMEM/F12基础培养基、SCF、rhG‑CSF、VEGF、PDGF、FGF2、NODAL、亚硒酸钠、L‑抗坏血酸‑2‑磷酸酯镁盐、AB血清；所述第一阶段培养基中所述的SCF、rhG‑CSF、VEGF、PDGF、FGF2、NODAL的终浓度比为(1‑2)∶(1‑2)∶(0.5‑1)∶(1‑2)∶(1‑4)∶(1‑4)。与现有技术相比，本发明具备如下有益效果：本发明通过使用低成本培养基及一些必要的细胞因子代替高成本培养基，降低了多能干细胞分化成造血干细胞的成本，为今后造血干细胞的使用提供更加切实可行的方案。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种低成本多能干细胞分化造血干细胞的培养基及培养方法。

背景技术

造血干细胞(hematopoietic stem cells,HSCs)是一类多能干细胞,位于特殊的造血微环境,主要存在于骨髓中。能自我更新和多向分化为各种功能的血细胞,维持血液系统的建立和动态平衡。造血干细胞的这些重要特性以及造血干细胞移植在临床上的广泛应用,结合基因治疗和基因编辑技术的进步,使得基于造血干细胞治疗多种血液疾病和免疫疾病的基因治疗研究在近年来取得了很大的进展。

许多血液学家提出CD34细胞在人体的有效输注量为5×10/kg，一些脐带血移植的权威们建议脐带血有核细胞的有效剂量为3.7×10/其中CD34细胞含量按0 6％计算有22×10/kg。上述脐带血有核细胞和CD34细胞的有效剂量都是从临床实践中总结出来的。因此，获得大剂量的CD34细胞是必要的，而目前比较有效的培养基大都价格昂贵，大大提高了获得CD34细胞的成本，对于研究用或病患用都是一个很大的问题。

现有的干细胞培养基，价格高昂，导致了干细胞的培养成本较高；并且传统方法中的人多能干细胞诱导分化培养基中通常将多能干细胞与不同的基质细胞共同培养，如OP9细胞等，直接定向诱导分化为造血细胞；然而方法中使用OP9细胞具有未知风险，安全性低

发明内容

本发明为了克服现有技术的不足，提供一种低成本多能干细胞分化造血干细胞的培养基及培养方法。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：一种低成本多能干细胞分化造血干细胞的培养基，包括第一阶段培养基和第二阶段培养基；

所述第一阶段培养基包括DMEM/F12基础培养基、SCF、rhG-CSF、VEGF、PDGF、FGF2、NODAL、亚硒酸钠、L-抗坏血酸-2-磷酸酯镁盐、AB血清；所述第一阶段培养基中所述的SCF、rhG-CSF、VEGF、PDGF、FGF2、NODAL的终浓度比为(1-2)∶(1-2)∶(0.5-1)∶(1-2)∶(1-4)∶(1-4)；

所述第二阶段培养基包括RPMI-1640基础培养基、CHIR99021、VEGF、SCF、IL-3、CSF、TGFβ1、Flt3L、EPO、胰岛素以及AB血清；所述第二阶段培养基中所述的CHIR99021、VEGF、SCF、IL-3、CSF、TGFβ1、Flt3L、EPO的终浓度比为(0.25-1)∶(1-2)∶(0.4-1.6)∶(0.4-1.6)∶(0.4-1.6)∶(0.01-0.1)∶(0.4-1.6)∶(0.4-1.6)。