[发明专利]一种低成本多能干细胞分化造血干细胞的培养基及培养方法

权利要求书

1.一种低成本多能干细胞分化造血干细胞的培养基，其特征在于，包括第一阶段培养基和第二阶段培养基；

所述第一阶段培养基包括DMEM/F12基础培养基、SCF、rhG-CSF、VEGF、PDGF、FGF2、NODAL、亚硒酸钠、L-抗坏血酸-2-磷酸酯镁盐、AB血清；所述第一阶段培养基中所述的SCF、rhG-CSF、VEGF、PDGF、FGF2、NODAL的终浓度比为(1-2)∶(1-2)∶(0.5-1)∶(1-2)∶(1-4)∶(1-4)；

所述第二阶段培养基包括RPMI-1640基础培养基、CHIR99021、VEGF、SCF、IL-3、CSF、TGFβ1、Flt3L、EPO、胰岛素以及AB血清；所述第二阶段培养基中所述的CHIR99021、VEGF、SCF、IL-3、CSF、TGFβ1、Flt3L、EPO的终浓度比为(0.25-1)∶(1-2)∶(0.4-1.6)∶(0.4-1.6)∶(0.4-1.6)∶(0.01-0.1)∶(0.4-1.6)∶(0.4-1.6)。

2.根据权利要求1所述的低成本多能干细胞分化造血干细胞的培养基，其特征在于，所述的第一阶段培养基中SCF的终浓度为50-100ng/mL、rhG-CSF的终浓度为50-100ng/mL、VEGF的终浓度为10-50ng/ml、PDGF的终浓度为50-100ng/mL、FGF2的终浓度为50-200ng/mL、NODAL的终浓度为50-200ng/mL、亚硒酸钠的终浓度为10-100ug/mL、L-抗坏血酸-2-磷酸酯镁盐的终浓度为50-200ng/mL、AB血清的体积分数为10％；所述的第二阶段培养基中CHIR99021的终浓度为1-5uM、VEGF的终浓度为50-100ng/mL、SCF的终浓度为20-80ng/mL、IL-3的终浓度为20-80ng/mL、CSF的终浓度为20-80ng/mL、TGFβ1的终浓度为0.5-5ng/mL、Flt3L的终浓度为20-80ng/mL、EPO的终浓度为20-80ng/mL、胰岛素的终浓度为10-50ug/mL、AB血清的终浓度为10％。

3.根据权利要求1所述的低成本多能干细胞分化造血干细胞的培养基，其特征在于，所述第一阶段培养基中，所述的SCF、rhG-CSF、VEGF、PDGF、FGF2、NODAL的终浓度比为1∶1∶0.5∶1∶2∶2；所述第二阶段培养基中，所述的CHIR99021、VEGF、SCF、IL-3、CSF、TGFβ1、Flt3L、EPO的终浓度比为0.04∶1.6∶1∶1∶1∶0.04∶1∶1。

4.根据权利要求1所述的低成本多能干细胞分化造血干细胞的培养基，其特征在于，所述第一阶段的培养基中SCF的终浓度为80ng/mL、rhG-CSF的终浓度为80ng/mL、VEGF的终浓度为40ng/mL、PDGF的终浓度为80ng/mL、FGF2的终浓度为100ng/mL、NODAL的终浓度为100ng/mL、亚硒酸钠的终浓度为20ug/mL、L-抗坏血酸-2-磷酸酯镁盐的终浓度为100ng/mL；所述第二阶段培养基中，CHIR99021的终浓度为2uM、VEGF的终浓度为80ng/mL、SCF的终浓度为50ng/mL、IL-3的终浓度为50ng/mL、CSF的终浓度为50ng/mL、TGFβ1的终浓度为2ng/mL、FLt3L的终浓度为50ng/mL、EPO的终浓度为50ng/mL、胰岛素的终浓度为20ug/mL、AB血清的终浓度为10％。

5.一种低成本多能干细胞分化造血干细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：将多能干细胞置于Aggrewell板中，并于权利要求1-4任一项所述的第一阶段培养基中进行第一阶段的诱导分化成为拟胚体；

S2：将拟胚体置于权利要求1-4任一项所述的第二阶段培养基中进行第二阶段的诱导分化。

6.根据权利要求5所述的低成本多能干细胞分化造血干细胞的方法，其特征在于，将多能干细胞接种于Aggrewell板进行拟胚体分化的第一阶段培养记为第0天，所述第一阶段的诱导分化自第0天开始至第4天结束，所述第二阶段的诱导分化自第4天开始至第12天结束。