[发明专利]一种DC瘤苗制备方法及其在肿瘤治疗中的应用

说明书

本发明涉及一种DC瘤苗制备方法及其在肿瘤治疗中的应用。本发明针对肝癌细胞特异性的制备得到了通过白藜芦醇提高了DC成熟度的DC瘤苗，所述瘤苗除了本身具有较好的抑制肝癌细胞增殖的效果之外，通过与PD‑1单克隆抗体的组合使用，能够显著的抑制肿瘤细胞的生长以及提高相关细胞因子的分泌，具有较好的应用价值。

技术领域

本发明属于生物领域，更具体的，涉及一种DC瘤苗制备方法及其在肿瘤治疗中的应用。

背景技术

树突状细胞（DC）是目前功能最强的抗原递呈细胞，能刺激初始型T细胞增殖，激发机体免疫应答。在机体的抗肿瘤免疫反应中，细胞免疫是主要的形式，而产生CD8+的细胞毒性T细胞是有效的抗肿瘤细胞免疫的核心。T细胞激活需要的信号接受量基于三个因素：激发信号转导的肽-MHC复合物的水平、增强信号过程的共刺激分子的水平及抗原递呈细胞(APC)与T细胞形成的免疫突触的稳定性，后者决定了信号过程的持续时间。而免疫突触的有效性则随APC和T细胞发展阶段而不同。未成熟的DC能够通过内吞作用高效地捕捉抗原，胞内加工处理后与MHI-I,II形成复合体，表达于DC表面，DC高水平地表达共刺激分子，提供T细胞活化的第二信号，诱导产生大量的效应T细胞，效应T细胞合成重要的细胞因子如IL-12,IFN-a，这些细胞因子激活多种免疫相关细胞。

研究发现肿瘤患者体内DC数量明显减少，其表型及功能明显缺陷。近年来DC瘤苗的研究取得较大进展，DC瘤苗有望成为肿瘤免疫治疗的新方法。目前，常用的瘤苗制备方法主要包括如下几种方式。

肿瘤细胞裂解物致DC：通过反复冻融或超声破碎肿瘤细胞后致敏DC，能产生特异性CTL及保护性免疫反应。此法无需明确肿瘤抗原，可诱导广泛的T细胞反应。现有技术中比较了辐射、煮沸、反复冻融3种肿瘤细胞制备的方法对DC递呈抗原的影响，结果负载了经辐射的肿瘤细胞的DC能有效激发抗原特异性CTL，而经煮沸或反复冻融的则不能诱导产生IFN-y，体内外实验表明肿瘤细胞的制备方法明显影响DC向T细胞递呈抗原的能力。由于肿瘤细胞提取物中包含自身正常抗原，免疫机体后有可能诱发自身免疫性反应。

抗原肽体外致敏DC：抗原肽是目前应用最广泛的用于致敏DC的肿瘤抗原。它通过特定的抗原表位与DC特定的MHC分子结合，能明显诱导机体产生抗原特异性CTL,激发机体抗肿瘤细胞免疫反应。由于目前仅少数肿瘤确定了能被T细胞识别的肿瘤抗原表位，如与黑色素瘤相关的gP100/Pmel-17、酪氨酸酶、MART-1、gp75/trp-1及MACE/BALE/GAGE基因族;前列腺特异性膜抗原 PSMA;癌胚抗原CEA:多发性骨髓瘤的独特型蛋白(Id )等。

凋亡的肿瘤细胞(ATCs)致敏DC：DC可有效递呈凋亡细胞的抗原，刺激CD8+CTL。用凋亡的黑色素瘤细胞致敏DC可上调IL-1. IL-6. TNF-a. GM-CSF. MHC- II 、CD86等水平，促使DC成熟，且成熟DC迁移至局部淋巴结的能力增强，诱导有效的抗肿瘤反应。研究发现ATC、免疫复合物(ATC-IC)能和DC表而的FcyR结合，并诱导DC成熟，可增强ATCs-DC疫苗的兔疫应答。当然还有肿瘤细胞与DC融合、DC中exosome小体等。

现有技术中，虽然制备DC瘤苗的方法很多，但是特异性针对肝癌的DC瘤苗还不够丰富，特别是将DC瘤苗与其他药物一起联合使用的方法也不够多，值得进一步关注。

发明内容

本发明克服现有技术的缺陷，提供了一种特异性针对肝癌的DC瘤苗以及相应的制备方法和用途。

一方面，本发明提供一种特异性针对肝癌的DC瘤苗，DC细胞的制备方法包括如下步骤：

（1）制备外周血单核细胞。