[发明专利]一种混菌耦合发酵规模化合成6’-唾液酸乳糖的方法

权利要求书

1.一种生产6'-唾液酸乳糖的方法，其特征在于，以CMP、唾液酸和乳糖为底物，通过酿酒酵母、表达α-2,6-唾液酸转移酶的重组菌和表达CMP-Neu5Ac合成酶的重组菌三株菌株混菌进行发酵；

或，以CMP和唾液酸为底物时，先加入酿酒酵母菌和表达CMP-Neu5Ac合成酶的重组菌合成CMP-Neu5Ac，再加入乳糖和表达α-2,6-唾液酸转移酶的重组菌；

或，以CTP、唾液酸和乳糖为底物时，加入表达CMP-Neu5Ac合成酶的重组菌和表达α-2,6-唾液酸转移酶的重组菌。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述α-2,6-唾液酸转移酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述CMP-Neu5Ac合成酶的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述重组菌以大肠杆菌、酵母菌或枯草芽孢杆菌为宿主。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述酿酒酵母包括但不限于酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae S189、Saccharomyces cerevisiae W13-06和GDMCC 61663。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，以CMP、唾液酸和乳糖为底物时，CMP-Neu5Ac合成酶的重组菌和表达α-2,3-唾液酸转移酶的重组菌的添加量为45～55g/L，酿酒酵母的添加量为30～150g/L。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，以CMP、唾液酸和乳糖为底物时，CMP、唾液酸和乳糖的含量分别为10-90mM、50～90mM和70～90mM。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在以CMP、唾液酸和乳糖为底物时，在28～32℃、180～220r/min条件下发酵。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，反应时间为25～40h。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，反应全程通无菌空气。

10.权利要求1～9任一所述方法生产的6'-唾液酸乳糖在制备婴幼儿奶粉或补剂中的应用。