[发明专利]一种微生物药敏的质谱检测方法

权利要求书

1.一种微生物药敏的质谱检测方法，其特征在于，所述质谱检测方法包括如下步骤：

设置抗生素处置组和无抗生素处置组两组，其中，抗生素处置组用含有抗生素的培养基孵育培养待测微生物，无抗生素处置组用不含有抗生素的培养基孵育培养待测微生物；

取两组孵育培养后的样品分别加入内标后进行质谱检测得到谱图，分别计算抗生素处置组和无抗生素处置组的谱图的曲线下面积，根据如下公式计算出RGR：

RGR＝AUC_{抗生素处置组}/AUC_{无抗生素处置组}；其中，AUC_{抗生素处置组}表示抗生素处置组的谱图的曲线下面积，AUC_{无抗生素处置组}表示无抗生素处置组的谱图的曲线下面积；

根据RGR值的临界点进行待测微生物对相应抗生素的耐药或敏感的判断。

2.根据权利要求1所述的质谱检测方法，其特征在于，所述抗生素的浓度为CLSI 2021药敏判断标准中的耐药节点浓度或者是所述耐药节点浓度以1～100倍稀释度稀释后的浓度，所述稀释后的浓度和CLSI 2021药敏判断标准中的耐药节点浓度成良好线性相关。

3.根据权利要求1所述的质谱检测方法，其特征在于，所述待测微生物在培养基中的浓度为1.0×10⁸～5.0×10⁸/mL。

4.根据权利要求1所述的质谱检测方法，其特征在于，所述内标为质量范围在4000～6000的多肽分子。

5.根据权利要求1所述的质谱检测方法，其特征在于，所述孵育培养是在37℃下培养一定时间，当待测微生物为结核分枝杆菌时培养时间为6d 20h±2d 5h，当待测微生物为非典型结核分枝杆菌时培养时间为6d 6h±1d 7h，当待测微生物为除结核分枝杆菌和非典型结核分枝杆菌外的其他细菌时培养时间为30min～6h。

6.根据权利要求1所述的质谱检测方法，其特征在于，所述待测微生物是结核分枝杆菌和非典型结核分枝杆菌时，所述孵育培养后的样品需要进行灭活后再加入内标进行质谱检测。

7.根据权利要求1所述的质谱检测方法，其特征在于，所述RGR值的临界点设置为0.4-0.5。

8.根据权利要求7所述的质谱检测方法，其特征在于，所述RGR值大于等于临界点时，表示待测微生物对相应抗生素耐药，所述RGR值小于临界点，表示待测微生物对相应抗生素敏感。

9.根据权利要求1所述的质谱检测方法，其特征在于，所述质谱检测方法还包括设置空白组，所述空白组与无抗生素处置组的区别在于只将不含有抗生素的培养基以与无抗生素处置组相同的孵育培养条件进行孵育培养，其他步骤相同。

10.根据权利要求1所述的质谱检测方法，其特征在于，所述质谱检测的条件为：激光频率1000Hz，质量范围3 000到15 000Da，正离子模式。