[发明专利]一种外泌体联合索拉非尼脂质体的构建方法

说明书

本发明提供了一种外泌体联合索拉非尼脂质体的构建方法，其特征在于包括以下步骤：(1)将索拉非尼和磷脂加入有机溶剂中，溶解混匀，得到索拉非尼磷脂复合物，再加入乳化剂、聚合物胶束剂，作为油相；(2)将外泌体溶于磷酸盐缓冲液中，作为水相，将水相加入到步骤(1)制得的油相中，形成水/油稳定初乳；(3)将水/油稳定乳液后处理得到外泌体联合索拉非尼脂质体。通过本方法制备得到的外泌体联合索拉非尼脂质体，具有分散性良好、包封率高、载药高、肿瘤靶向性和治疗效果好、安全性好的特征。

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及索拉非尼药用载体，更具体地，涉及一种外泌体联合索拉非尼脂质体的构建方法。

背景技术

原发性肝癌肿瘤是目前临床上最普遍的一种恶性肿瘤，根据临床研究结果表明，原发性肝癌中90％以上为肝细胞癌(HCC)，而在亚洲的肝细胞癌发病率和致死率都较高，严重影响到人们的生命健康。现在，外科手术治疗HCC是最有效的一种方式，然而，早期诊断HCC手术难度大，切除率低，而且癌细胞的复发和转移对治疗有严重影响HCC。大部分(85％)HCC我国患者在确诊时已错过最佳手术期。中国无论是癌症发生数还是死亡数均高居世界首位。

索拉非尼(SOR)是一种靶向的小分子服用抗癌药物，是首个被FDA批准用于治疗HCC的靶点抗肿瘤药物。它通过抑制丝氨酸-苏氨酸激酶、血管内皮生长因子受体和血小板源性生长因子受体来抑制肿瘤血管生成，并通过阻止信号传导路径抑制肿瘤细胞增殖，从而起到双重抑制和多靶点阻止抗肿瘤的作用。

尽管SOR治疗肝癌有一定作用，但SOR对酪氨酸激酶作用抑制了肿瘤的血管形成，导致了不良的治疗效果。SOR作为小分子药物疗效较好，纳米脂质体具有良好的肿瘤靶向性，两者结合可提高治疗效率和增加药物的稳定性。然而目前市场上的SOR剂型毒副作用大，体内新陈代谢较快，半衰期短，体内药物含量峰值效应明显，严重影响治疗疗效，SOR缺乏进入体内病灶部位选择性，故需要大剂量频繁给药，可能会导致严重耐药性。

近年来，外泌体(small ExtracellularVesicles,Exo)作为天然的细胞间信息传递载体，在肿瘤发生、发展、转移过程中发挥着重要作用，也已经被用于肿瘤无创诊断、靶向药物递送、肿瘤疫苗、膜蛋白递呈、免疫检查点治疗等领域。近年来，外泌体以“天然纳米粒子”作为药物的载体使用，已成为人们关注的焦点。国内外研究发现，向外泌体中载入相关的microRNA、siRNA，抗肿瘤药物等均表现出高效的靶向性及药物传递功能，为治疗各种疾病提供了有效的手段。有研究证实，在异种肿瘤移植的裸鼠肺癌模型中，以外泌体作为紫杉醇的药物载体进行干预，既明显抑制了肿瘤的生长，又显著降低了药物本身的毒性。通过基因工程使小鼠未成熟树突状细胞来源的外泌体表达一种特异性外泌体膜蛋白(Lamp2b)，使其与av整合素特异性IRGD肽融合或将其融合到神经元特异性RVG肽上，均表现出高效的靶向性及药物传递。间充质干细胞来源的外泌体表面有特殊的分子，可避免与抗体、凝血因子等产生作用，避免体内产生免疫反应，提高药物的安全性；4)由于外泌体具有递送生物分子的功能，可以与细胞膜融合，直接将药物输送到细胞质，通过逃避吞噬溶酶体，显著提高弱势分子传递的效率。此外，外泌体作为一种亚细胞成分的膜结构载体，与其它纳米载体相比，体积较小、易保存、高度稳定，具有极高的生物相容性和体内安全性；不易被单核吞噬细胞系统清除；极大地减少了非靶向的肝脏富集，从而可减少对肝脏的毒性及实现装载药物的有效利用。

基于上述背景，构建了一种全新的药物输送系统，提高局部药物浓度，使药物在局部缓慢释放，延长药物对肿瘤细胞的作用时间，同时增加药物的靶向作用和药物在肿瘤细胞的蓄积，提高肿瘤治疗的效果。

发明内容

本发明要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种提高局部药物浓度、延长药物对肿瘤细胞的作用时间、增强药物靶向作用、提高治疗肿瘤效果的药物输送系统的构建方法。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

首先，本发明提供一种外泌体联合索拉非尼脂质体的构建方法，包括以下步骤：