[发明专利]一种外泌体联合索拉非尼脂质体的构建方法

权利要求书

1.一种外泌体联合索拉非尼脂质体的构建方法，包括以下步骤：

(1)将索拉非尼和磷脂加入有机溶剂中，溶解混匀，得到索拉非尼磷脂复合物，再加入乳化剂、聚合物胶束剂，作为油相，所述索拉非尼和磷脂的质量比为1:5～1:25，优选1:15～1:20；所述有机溶剂为醇类或卤代烃或混合溶剂，优选的，所述醇类溶剂选自甲醇或乙醇，所述卤代烃溶剂选自二氯甲烷或三氯甲烷；

(2)将外泌体溶于PBS中，作为水相，将水相加入到步骤(1)制得的油相中，水化超声混匀形成水/油稳定初乳；

(3)将步骤(2)制备的水/油稳定初乳后处理得到外泌体联合索拉非尼脂质体。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述磷脂选自大豆磷脂、二月桂酰卵磷脂、二硬脂酰卵磷脂、二硬脂酰卵磷脂、蛋黄卵磷脂、二油酰基卵磷脂、二油酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺，优选为大豆磷脂、二油酰基卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺，更优选二硬脂酰磷脂酰乙醇胺。

3.根据权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，所述有机溶剂为甲醇与三氯甲烷的混合溶剂。

4.根据权利要求1-3任一项所述的构建方法，其特征在于，所述乳化剂选自胆固醇和聚乙二醇(PEG)修饰的磷脂复合物、磷脂/胆固醇复合物，最优选胆固醇和聚乙二醇(PEG)修饰的磷脂复合物。

5.根据权利要求1-4任一项所述的构建方法，其特征在于，所述聚合物胶束剂选自聚乙二醇、O-羧甲基壳聚糖十八烷基季铵盐、羧甲基壳聚糖十六烷基季铵盐、透明质酸、聚乳酸、聚乳酸-聚乙醇酸共聚物，优选羧甲基壳聚糖十六烷基季铵盐和聚乳酸-聚乙醇酸共聚物的一种或几种，最优选羧甲基壳聚糖十六烷基季铵盐。

6.根据权利要求1-5任一项所述的构建方法，其特征在于，所述外泌体选自细胞培养上清、血清、血浆、脑脊液、组织样本，所述细胞来源于内皮细胞、免疫细胞、平滑肌细胞、干细胞，优选干细胞，最优选骨髓间充质干细胞(BMSC)。

7.根据权利要求1-6任一项所述的构建方法，其特征在于，水化的时间为0.5-2小时，超声的时间为1～30分钟。

8.根据权利要求1-7任一项所述的构建方法，其特征在于，所述后处理为将水/油稳定初乳旋转蒸发，得到薄膜溶胀水合后所得悬浊液过滤得到外泌体联合索拉非尼脂质体。

9.一种外泌体联合索拉非尼脂质体的构建方法，包括以下步骤：

(1)将质量比为1：15的索拉非尼和磷脂加入甲醇和三氯甲烷的混合液中，溶解混匀，得到索拉非尼磷脂复合物，再加入胆固醇和PEG修饰的磷脂复合物、羧甲基壳聚糖十六烷基季铵盐乳化剂，作为油相；

(2)将骨髓间充质干细胞的外泌体溶于PBS中，作为水相，将水相加入到步骤(1)制得的油相中，水化超声混匀，形成水/油稳定初乳；

(3)将水/油稳定乳液旋转蒸发，得到薄膜溶胀水合后所得悬浊液过滤得到外泌体联合索拉非尼脂质体。

10.一种外泌体联合索拉非尼脂质体，其特征在于，采用权利要求1-9任一项所述方法制备。