[发明专利]编码可溶性HPV58 L1蛋白的基因及其重组质粒的构建与应用

权利要求书

1.一种编码可溶性人乳头瘤病毒58亚型L1蛋白的基因HPV58L1，其DNA序列如SEQ IDNO.1所示。

2.一种载体质粒pUC-58L1，包括载体质粒pUC57及装载其中的权利要求1所述基因HPV58L1。

3.一种重组质粒pESUMO-58L1，包括载体质粒pE-SUMO及装载其中的权利要求1所述基因HPV58L1。

4.一种表达可溶性HPV58 L1蛋白的重组质粒，含有权利要求1所述基因HPV58L1。

5.权利要求4所述表达可溶性HPV58L1蛋白的重组质粒的构建方法，包括如下步骤：

（1）基于权利要求1所述基因HPV58L1设计其扩增引物，且其正向引物包含Bsa I限制性内切酶位点、反向引物包括位于终止密码子侧翼的Xho I限制性内切酶位点；

（2）以所述扩增引物PCR扩增基因HPV58L1；

（3）取pESUMO质粒与所得PCR扩增产物分别进行限制性内切核酸酶Bsa I与Xho I双酶切消化，回收空载体质粒pE-SUMO和HPV58L1基因的双酶切产物，用T4 DNA连接酶16℃连接过夜，得到重组质粒；

（4）将上步所得重组质粒pESUMO-58L1转化大肠杆菌感受态细胞BL21，涂布在Amp⁺/LB固体培养基上培养，挑取单菌落进行菌液PCR鉴定，筛选阳性菌落，提取阳性菌落质粒，测序结果正确的即为表达可溶性HPV58 L1蛋白的重组质粒。

6.根据权利要求5所述重组质粒的构建方法，其特征在于，所述扩增引物的序列如下：

F-58：5’- TTGGTCTCTAGGTATGTCCGTGTGGCGTC -3’， 酶切位点：Bas I；

R-58：5’- CCGCTCGAG TTATTTTTTAACCTTTTTGCGT -3’，酶切位点：Xho I。

7.一种可溶性HPV58 L1蛋白的制备方法，包括如下步骤：

（1）取权利要求3所述重组质粒pESUMO-58L1接种于Amp⁺/LB液体培养基中培养至OD₄₅₀值至0.75～0.85时，以诱导剂IPTG诱导表达；

（2）诱导表达结束后，离心收集菌体，清洗后破碎，并离心分离，收集上清液；

（3）将所述上清液通过Ni亲和层析柱进行洗脱纯化得SUMO-58 L1蛋白。

8.权利要求1所述基因HPV58L1、权利要求2载体质粒pUC-58L1、权利要求3重组质粒pESUMO-58L1或权利要求7所述可溶性HPV58 L1蛋白在疫苗制备中的应用。