[发明专利]一种人间充质干细胞培养基及其应用

说明书

本发明涉及干细胞培养技术领域，公开了一种人间充质干细胞培养基及其应用。本发明所述培养基以DMEM/F12为基础培养基添加如下成分：人血白蛋白、人转铁蛋白、人胰岛素、纤连蛋白、胆固醇、亚硒酸钠、氢化可的松、腐胺、β‑巯基乙醇、乙醇胺、L‑抗坏血酸、bFGF、EGF、PDGF‑BB、SCF、烟酰胺和阿卡地新。本发明提供了一种间充质干细胞无血清培养基，在优化培养基成分的基础上，添加了四种特定生长因子、阿卡地新和烟酰胺，可以增强细胞的增殖能力，在细胞传代过程中，减缓细胞的衰老过程，同时适用于间充质干细胞原代培养。

技术领域

本发明涉及干细胞培养技术领域，更具体的说是涉及一种人间充质干细胞培养基及其应用。

背景技术

间充质干细胞是目前倍受关注的一类具有自我更新能力和多向分化潜能的组织干细胞，可以从脐带、脂肪、胎儿血液、骨髓、肝脏等组织获得。MSCs虽来源于中胚层，但在特定条件下，可分化为各胚层的多种细胞或组织，如骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、心肌细胞、神经样细胞、内皮细胞以及肝细胞等，这为临床应用间充质干细胞治疗多种疾病提供了一个广阔的前景。但在MSCs质量研究及临床前研究上，细胞数的需求量较大，需要建立适宜的培养条件进行体外扩增。

传统方法中，干细胞的培养体系主要应用含动物血清(如胎牛血清)的培养基，但是动物血清所带来的异源性污染和已知或未知的病毒、支原体等病原体污染，在此种环境下生长的干细胞，其内部结构会发生何种变化尚未可知，为MSCs的临床研究带来潜在的风险。相比较而言，无血清培养体系的研发对MSCs临床应用的标准化和安全性具有重要的意义。

市场上商品化的MSCs无血清培养基如Stem Cell公司的Mesent Cult-XF Medium，Gibco公司的Stem PRO MSC SFM等基本都从国外进口，价格昂贵，并且细胞生长周期短，细胞增殖效果不够理想，细胞衰老快，不适用于原代分离培养等缺点。

国内的一些产品和技术同样面临类似的问题：(1)无血清培养基成分复杂、配制困难；(2)培养基组份虽相对简单，但细胞存在体外长期培养，会发生衰老，细胞增殖率和多向分化能力下降。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种人间充质干细胞培养基，使得所述培养基无需添加血清，并可增强细胞的增殖能力，在细胞传代过程中，减缓细胞的衰老过程，同时可适用于间充质干细胞原代培养。

本发明的另外一个目的在于提供上述培养基在制备间充质干细胞中的应用。

为实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案：

一种人间充质干细胞培养基，以DMEM/F12为基础培养基添加如下成分：

人血白蛋白、人转铁蛋白、人胰岛素、纤连蛋白、胆固醇、亚硒酸钠、氢化可的松、腐胺、β-巯基乙醇、乙醇胺、L-抗坏血酸、bFGF、EGF、PDGF-BB、SCF、烟酰胺和阿卡地新。

为解决商品化无血清培养基高成本及目前无血清培养基培养条件下间充质干细胞在传代中易于老化的问题，本发明在优化培养基成分的基础上，主要添加了4种特定的促进细胞生长的因子和能延缓细胞衰老的烟酰胺(Nicotinamide,NAM)和阿卡地新(5-氨基咪唑-4-羧基酰胺核糖核苷，AICAR)，组成间充质干细胞无血清培养基的最优配方，4种生长因子适配于烟酰胺与阿卡地新，可促进间充质干细胞的各项性能。

作为优选，各成分在基础培养基中的浓度为：