[发明专利]一种检测禽白血病群特异性抗原的双抗夹心间接ELISA方法

权利要求书

1.一种检测禽白血病群特异性抗原的双抗夹心间接ELISA方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)用禽白血病病毒RSA株p27基因序列设计一对引物以扩增p27基因，构建重组表达载体经诱导表达获得重组表达蛋白上清表达，上清表达经过纯化后作为免疫原，制备兔源、鼠源多克隆抗体；

2)对包被兔源多克隆抗体的酶标板进行洗涤，37℃封闭1h，洗板；

3)加入待检血清进行孵育，洗板；

4)加入鼠源多克隆抗体进行孵育，洗板；

5)加入酶标二抗进行孵育，洗板；

6)加入TMB显色液显色，最后加入显色终止液，终止反应；

7)利用酶标仪测定步骤4)酶标板孔中液体OD₄₅₀nm值，根据临界值判定阴阳性。

2.根据权利要求1所述的检测禽白血病群特异性抗原的双抗夹心间接ELISA方法，其特征在于，所述禽白血病病毒为病毒RSA株。

3.根据权利要求1所述的检测禽白血病群特异性抗原的双抗夹心间接ELISA方法，其特征在于，所述一对引物的引物序列如下：

p27-EcoR I-F：CGGAATTCATGCCTGTAGTGATTAAGACAG；

p27-Xba I-R：GCTCTAGACCTAGGGCTGGATAGCAGAC。

4.根据权利要求1所述的检测禽白血病群特异性抗原的双抗夹心间接ELISA方法，其特征在于，所述包被兔源多克隆抗体的浓度为4μg/mL，包被条件为37℃2h后4℃过夜。

5.根据权利要求1所述的检测禽白血病群特异性抗原的双抗夹心间接ELISA方法，其特征在于，所述待检血清的反应条件为37℃作用1h。

6.根据权利要求1所述的检测禽白血病群特异性抗原的双抗夹心间接ELISA方法，其特征在于，所述鼠源多克隆抗体的稀释倍数为1:400，反应条件为37℃作用0.5h。

7.根据权利要求1所述的检测禽白血病群特异性抗原的双抗夹心间接ELISA方法，其特征在于，所述酶标二抗的反应时间为37℃作用1h。

8.根据权利要求1所述的检测禽白血病群特异性抗原的双抗夹心间接ELISA方法，其特征在于，所述显示的条件为37℃作用20min。

9.根据权利要求1所述的检测禽白血病群特异性抗原的双抗夹心间接ELISA方法，其特征在于，所述临界值判定阴阳性的标准为：当OD₄₅₀nm大于0.427是阳性，小于0.427是阴性。