[发明专利]用于创伤弧菌检测的RAA引物组、crRNA序列及RAA-CRISPR方法

权利要求书

1. 用于创伤弧菌检测的RAA引物组，其特征在于：其为RAA-F1和RAA- R1构成的引物对或RAA-F2和RAA-R2构成的引物对；

RAA-F1的序列如SEQ ID NO.1所示；

RAA- R1的序列如SEQ ID NO.2所示；

RAA-F2的序列如SEQ ID NO.3所示；

RAA-R2的序列如SEQ ID NO.4所示。

2.根据权利要求1所述的用于创伤弧菌检测的RAA引物组，其特征在于：其为RAA-F2和RAA-R2构成的引物对。

3.一种用于创伤弧菌检测的特异性crRNA，其特征在于：其为crRNA1、crRNA2、crRNA3、crRNA4中的一种或多种；

crRNA1的序列如SEQ ID NO.5所示；

crRNA2的序列如SEQ ID NO.6所示；

crRNA3的序列如SEQ ID NO.7所示；

crRNA4的序列如SEQ ID NO.8所示。

4.根据权利要求3所述的用于创伤弧菌检测的特异性crRNA，其特征在于：其为crRNA3和crRNA4的混合。

5.一种用于创伤弧菌检测的试剂盒，其特征在于：包括RAA引物组、特异性crRNA、Cas12a蛋白、荧光探针；

其中RAA引物组为RAA-F1和RAA- R1构成的引物对或RAA-F2和RAA-R2构成的引物对；

RAA-F1的序列如SEQ ID NO.1所示；

RAA- R1的序列如SEQ ID NO.2所示；

RAA-F2的序列如SEQ ID NO.3所示；

RAA-R2的序列如SEQ ID NO.4所示；

特异性crRNA为crRNA1、crRNA2、crRNA3、crRNA4中的一种或多种；

crRNA1的序列如SEQ ID NO.5所示；

crRNA2的序列如SEQ ID NO.6所示；

crRNA3的序列如SEQ ID NO.7所示；

crRNA4的序列如SEQ ID NO.8所示。

6.根据权利要求5所述的用于创伤弧菌检测的试剂盒，其特征在于：其中RAA引物组为RAA-F2和RAA-R2构成的引物对；特异性crRNA为crRNA3和crRNA4的混合。

7.根据权利要求5所述的用于创伤弧菌检测的试剂盒，其特征在于：所述荧光探针为5’6-FAM-TTATT-3’BHQ1。

8.一种创伤弧菌检测方法，其特征在于：其采用如权利要求5-7任一项所述的用于创伤弧菌检测的试剂盒，其包括以下步骤：

（1）对被测试样进行基因组提取，得到待测基因组样品；

（2）采用RAA引物组对待测基因组样品扩增；

（3）将Cas12a蛋白和crRNA，合并于一管，振荡离心后孵育形成核糖核蛋白体，将步骤（2）的产物和荧光探针加入到创伤弧菌检测检测体系中，振荡离心后，切割反应；

（4）检测体系的荧光强度。

9. 根据权利要求8所述的创伤弧菌检测方法，其特征在于：步骤（2）中RAA引物组与待测基因组样品扩增反应的时间为15-30 min。

10. 根据权利要求8所述的创伤弧菌检测方法，其特征在于：步骤（3）中，切割反应为15-30 min。