[发明专利]一种小鼠食管鳞癌细胞系及其建立方法和应用

权利要求书

1.一种小鼠食管鳞癌稳定细胞系的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)小鼠原位食管鳞癌模型建立：

采用化学试剂诱导小鼠食管粘膜细胞癌变；

2)小鼠食管鳞癌细胞系培养：

取出小鼠食管肿瘤组织用无血清培养基清洗，切块，置于含有20％FBS的DMEM培养基，恒温培养；

培养过程中，将有细胞爬出的组织块继续培养，之后弃去培养基，清洗，加入胰酶消化，离心取上清，将细胞沉淀重悬后重新铺于培养瓶中培养，即得到小鼠食管鳞癌稳定细胞系。

2.由权利要求1所述的小鼠食管鳞癌稳定细胞系的建立方法，其特征在于，步骤1)所述化学试剂包括采用丙二醇配制得到的4-NQO原液。

3.由权利要求1所述的小鼠食管鳞癌稳定细胞系的建立方法，其特征在于，步骤2)所述无血清培养基包括含有双倍双抗的无血清DMEM培养基。

4.由权利要求1所述的小鼠食管鳞癌稳定细胞系的建立方法，其特征在于，步骤2)所述培养过程中，所得肿瘤组织无需消化，直接切成小块后放入培养皿培养，培养基含较高浓度的FBS，细胞将由组织块直接爬出，期间除去没有细胞爬出的组织块。

5.由权利要求1所述的小鼠食管鳞癌稳定细胞系的建立方法，其特征在于，步骤2)所述的将有细胞爬出的组织块继续培养，更换培养液。

6.一种权利要求1～5任一项所述的建立方法制得的小鼠食管鳞癌稳定细胞系。

7.一种权利要求6所述的小鼠食管鳞癌稳定细胞系应用于体外稳定培养以及构建小鼠食管癌细胞模型，用于食管癌免疫研究。