[发明专利]基于催化发夹自组装恒温扩增技术检测核酸的通用探针及其应用

权利要求书

1.一种检测核酸的试剂盒，包含：

通用探针；和

启动发夹H0；

所述核酸为piR-651；

所述启动发夹H0从5’到3’依次包括：第一序列、第二序列和第三序列；

所述第一序列与所述发夹探针H1的5’端互补，第一序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.17

所示；

所述第二序列与所述核酸互补；

所述第三序列与所述第一序列的3’端及所述第二序列的5’端的三个碱基互补形成茎部分，所述第三序列的碱基数为10个；

所述通用探针包含发夹探针H1和发夹探针H2；所述发夹探针H1的核苷酸序列如SEQ

ID NO.4所示；所述发夹探针H2的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述启动发夹H

0的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述发夹探针H1上修饰有第一荧光基团，所述发夹探针H2上修饰有第二荧光基团，且所述第一荧光基团与所述第二荧光基团之间可以发生荧光共振能量转移。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：

所述第一荧光基团和第二荧光基团选自(1)～(3)：

(1)所述第一荧光基团为Cy3，所述第二荧光基团为Cy5；

(2)所述第一荧光基团为Alexa488，所述第二荧光基团为Cy3；

(3)所述第一荧光基团为FITC，所述第二荧光基团为Rhodamine Red。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：

所述试剂盒还包括NaCl、缓冲液。

4.权利要求1～3中任一项所述的试剂盒在非疾病诊断用途的核酸检测中的应用。

5.一种非疾病诊断用途的核酸检测方法，用权利要求3所述的试剂盒检测待测样品。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：

将待测样品、启动发夹H0、发夹探针H1、发夹探针H2、NaCl、缓冲液混合，35～50℃

下孵育2～4h，测定荧光信号强度。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：

所述启动发夹H0、发夹探针H1、发夹探针H2的摩尔比为30：(50～80)：(50～100)。

8.根据权利要求5～7任一项所述的方法，其特征在于：所述待测样品包括核酸、预处理后的包含核酸的外泌体和预处理后的包含核酸的血浆。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述预处理后的包含核酸的外泌体通过如下方法得到：将包含核酸的外泌体、Triton X-100、蛋白酶K混合，35～40℃孵育20～40min。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述预处理后的包含核酸的血浆通过如下方法得到：将包含核酸的血浆与蛋白酶K混合，35～40℃孵育20～40min；加入蛋白酶抑制剂，35～40℃孵育10～30min；加入核糖核酸酶A35～40℃孵育20～40min；加入十二烷基硫酸钠；加入Triton X-100、蛋白酶K，35～40℃孵育20～40min。