[发明专利]禽减蛋综合征病毒亚单位纳米颗粒抗原及其应用

说明书

本发明涉及禽减蛋综合征病毒亚单位纳米颗粒抗原，该亚单位纳米颗粒抗原由禽减蛋综合征病毒Knob‑HPF融合蛋白自我组装而成；该Knob‑HPF融合蛋白的蛋白序列从N端到C端依次由禽减蛋综合征病毒Fiber蛋白的Knob区、linker以及幽门螺杆菌Ferritin(HPF)的N端片段组成；该禽减蛋综合征病毒Fiber蛋白的Knob区为SEQ ID NO:1或其简并序列所编码。该亚单位纳米颗粒抗原呈二十四聚体的球形纳米颗粒，抗原滴度高，制备的疫苗具有良好的免疫保护作用。

技术领域

本发涉及禽减蛋综合征病毒亚单位纳米颗粒抗原，制备的疫苗组合 物，制备方法及应用，属于生物制药领域。

背景技术

目前，禽减蛋综合征病毒在世界许多国家广泛传播，给养鸡业造成 巨大经济损失，针对禽减蛋综合征病毒(EDS-76)的免疫防控多以灭 活疫苗为主，灭活疫苗在免疫过程中易出现不同程度的副反应，而现有 的一些亚单位疫苗在保护效力方面又达不到灭活疫苗的效果。

禽减蛋综合征病毒(EDS-76)是腺病毒属III群的唯一成员，病毒 粒子大小为76-80nm左右，呈二十面体对称，其基因组由线性双链DNA 组成。EDS-76的晚期RNA转录产物根据剪切方式和终止位点的不同可 分为L1、L2、L3、L4和L5，其中L5主要编码五邻体基座上的纤维蛋 白(Fiber)，该蛋白长约25nm，主要负责识别宿主细胞上的特异受体， 进而实现病毒的侵入和内化。Fiber蛋白根据功能域可进一步划分为纤 维状的尾部区、杆状的茎部区及球状的头部区(Knob)，Knob区包含 有多个血凝位点及病毒中和抗体的结合位点，是病毒重要的免疫原性功 能区域。研究表明，Fiber蛋白的血凝活性与其免疫原性及保护效果呈一定的正相关。然而，单独表达的Knob蛋白血凝活性显著降低，因此， Knob蛋白是否能通过提高血凝活性，以成功制备免疫原性良好的亚单 位疫苗，现有技术中尚未有报道。

Ferritin是幽门螺杆菌(Helicobactor pylori)编码的一种铁蛋白，可 形成二十四聚体，进而组装成八面体结构的球形颗粒。Ferritin的N端 可容载较大片段的外源DNA序列，能够在保持其自身正确结构形成的 同时对外源蛋白进行充分展示，实现抗原的多聚化，进而诱导产生更强 的免疫反应，是一种很好的纳米颗粒载体。

因此，研究开发抗原滴度高、免疫效果好的禽减蛋综合征病毒亚单 位疫苗是一项具有重要临床意义的工作。

发明内容

本发明的主要目的是提供一种禽减蛋综合征病毒亚单位纳米颗粒 抗原，其中，所述禽减蛋综合征病毒亚单位纳米颗粒抗原由禽减蛋综合 征病毒Knob-HPF融合蛋白自我组装而成；所述禽减蛋综合征病毒 Knob-HPF融合蛋白的蛋白序列从N端到C端依次由禽减蛋综合征病毒 Fiber蛋白的Knob区、linker以及幽门螺杆菌Ferritin(HPF)的N端片段 组成；所述禽减蛋综合征病毒Fiber蛋白的Knob区为SEQ ID NO:1或其 简并序列所编码。

本发明的禽减蛋综合征病毒亚单位纳米颗粒抗原，抗原滴度高、免 疫效果好，能够有效预防禽减蛋综合征病毒的感染。本发明通过将禽减 蛋综合征病毒(EDS-76)编码的Fiber蛋白的Knob区与幽门螺杆菌编码 的Ferritin(以下简称HPF)的N端融合，进而通过HPF的折叠使抗原蛋 白得到多聚化展示表达，形成二十四聚体结构的球形纳米颗粒抗原。所 述Knob-HPF重组纳米颗粒较Knob蛋白具有更高的血凝活性，表达的亚 单位纳米颗粒抗原验证了Knob蛋白通过提高血凝活性，能制备免疫原 性良好的亚单位疫苗。

本发明还涉及一种禽减蛋综合征病毒亚单位疫苗，其中，所述禽减 蛋综合征病毒亚单位疫苗包含所述的禽减蛋综合征病毒亚单位纳米颗 粒抗原、以及药学上可以接受的载体；所述的禽减蛋综合征病毒亚单位 纳米颗粒抗原的量为致免疫量。