[发明专利]一种高赖氨酸生物饲料的制备方法

权利要求书

1.一种高赖氨酸生物饲料的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一；制备赖氨酸种子液：葡萄糖50-80g/L、酵母膏30-50g/L、玉米浆4-7g/L、磷酸二氢钾3-6g/L、磷酸氢二钾0.5-1.5g/L、七水硫酸亚铁0.3-0.6g/L、七水硫酸镁0.3-0.7g/L、生物素10-20mg/L、维生素B1 3-7mg/L；

步骤一(1)；将谷氨酸棒杆菌接种到培养液中，培养60-80h；

步骤二；赖氨酸扩大培养种子液：当步骤一中的种子液中谷氨酸棒杆菌的密度达到4×10⁸-5×10⁸CFU/mL时，转入扩大培养。

将赖氨酸种子液按照8％-10％的比例接种到扩大培养液中，调节pH为7.0，在25-35℃条件下培养70h-80h，得到扩大培养种子液；

步骤三；制备黑曲霉培养液：称取马铃薯15-25％，蔗糖2-4％，其余为水；将黑曲霉菌种接种到马铃薯培养液中，且黑曲霉菌种占培养液重量的3-5％，28℃，通风条件下培养28h；

步骤四；制备固态发酵培养基：按质量称取鲜食玉米副产品40-55％、豆渣30-40％(水分30％)、麸皮10-20％，按照接种量为6-8％加入黑曲霉菌种液，使菌种液的接种量占固态发酵培养基的6-8％，控制固态发酵培养基的含水量不超过60％，在25℃通风条件下，发酵80h；

步骤四(1)；酶解反应：向步骤四制备好的固态发酵培养基中加入溶菌酶和酸性蛋白酶；

步骤五；赖氨酸发酵：将步骤二制备的赖氨酸扩大培养种子液加入到步骤四(1)酶解后的固态发酵培养基中，添加量为8％，进行好氧发酵，发酵温度为32-35℃，时间为80h，制成多酶高赖氨酸饲料。

2.如权利要求1所述的一种高赖氨酸生物饲料的制备方法，其特征在于：对所述步骤一制成的赖氨酸种子液进行灭菌处理，110℃蒸汽处理时间15min进行灭菌，待培养液冷却至25℃-35℃时。

3.如权利要求1所述的一种高赖氨酸生物饲料的制备方法，其特征在于：所述步骤二中赖氨酸扩大培养种子液的具体含量如下：葡萄糖15-30g/L、(NH₄)₂SO₄ 3-6g/L、尿素0.5-1.2g/L、玉米浆1.5-2.5g/L、磷酸二氢钾0.8-1.3g/L、磷酸氢二钾0.6-1.3g/L、七水硫酸亚铁0.3-0.8g/L、七水硫酸镁0.2-0.4g/L、生物素10-20mg/L、维生素B14-6mg/L。

4.如权利要求1所述的一种高赖氨酸生物饲料的制备方法，其特征在于：所述步骤四中，鲜食玉米副产品主要为去除鲜食玉米的玉米芯、玉米残余、少量玉米袍衣。

5.如权利要求1所述的一种高赖氨酸生物饲料的制备方法，其特征在于：所述步骤四(1)中酶解时pH为5.8-6.2，温度为55℃。溶菌酶的添加量为0.02％-0.03％，酸性蛋白酶的添加量0.01％；酶解时间24h；酶解后对酶解物进行灭菌处理，110℃，蒸汽处理时间15min。

6.如权利要求1所述的一种高赖氨酸生物饲料的制备方法，其特征在于：所述步骤五中需要在发酵的48h-80h期间，开始喷淋添加玉米浆，氨水，以补充糖和氮的不足，且喷淋添加玉米浆的量以控制在发酵底物的含水量不超过85％。

7.如权利要求6所述的一种高赖氨酸生物饲料的制备方法，其特征在于：所述步骤五中谷氨酸棒杆菌发酵过程中需要进行搅拌处理，搅拌速度为15-50转/分；在不高于85℃的温度下进行干燥至含水量小于15％。

8.如权利要求1所述的一种高赖氨酸生物饲料的制备方法，其特征在于：所述步骤三中需要对马铃薯培养液在121℃温度下灭菌处理15min。

9.如权利要求4所述的一种高赖氨酸生物饲料的制备方法，其特征在于：所述步骤四中鲜食玉米副产品、豆渣、麸皮的比例达到5:4:1。