[发明专利]一种空间邻近化学发光二步法检测抗体的试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种空间邻近化学发光二步法检测抗体的试剂盒及方法，所述试剂盒包括：发光标记物、酶标记物、生物素标记抗原固相包被物、辅助剂、触发剂和校准品；所述发光标记物原料组分包括9,10‑二氢吖啶标记的抗人免疫球蛋白单克隆抗体；所述酶标记物原料组分包括HRP标记的亲和素/链霉亲和素；本发明在检测体系中导入链霉亲和素/生物素系统，应用空间邻近化学发光技术能够完成许多需要二步法才能完成检测的临床项目，从而提高空间邻近化学发光技术临床应用范围和价值；同时引入生物素‑亲和素/链霉亲和素系统，可以大大提高化学发光效率，提高检测灵敏度；该体系可用于自动免疫化学发光系统，POCT及微流控芯片等快速定量分析。

技术领域

本发明涉及化学发光试剂盒技术领域，具体涉及一种空间邻近化学发光二步法检测抗体的试剂盒及方法。

背景技术

空间邻近化学发光技术是一种均相化学发光技术，发明人为美国H·阿哈万-塔夫狄，“非分离式测定方法”一步法检测。专利申请号201010616899.1的中国专利申请公开了一种非分离测定方法，其原理是一个抗体上标记辣根过氧化物酶(HRP)，另一个抗体上标记9,10-二氢吖啶(Acridan)，当样本中的抗原与特异性二个抗体标记物形成抗原抗体夹心复合物，使得辣根过氧化物酶与9,10-二氢吖啶(Acridan)在空间上得以相互接近，加入激发液后发光，通过已知浓度的校准品及其发光值绘制工作曲线，即可根据样本的发光值计算出样本中待测抗原的含量。该技术不需洗涤，真正均相，简单快速，已在临床上得到应用。

空间邻近化学发光技术的优势很明显，反应过程不需包被，不需洗涤，简单快速，但在临床应用过程中也存在不足，如临床上有许多检测项目需通过二步法才能完成，即通过洗涤步骤，排除非特异性的干扰，例如自身抗体检测等，现有的空间邻近化学发光技术则无法完成二步法检测，使得该技术在临床应用中存在局限性，很多项目由于方法学的局限性无法检测。

如对寨卡病毒抗体检测时，也需要二步法完成，检测过程需要通过洗涤，除去非特异的免疫球蛋白，即可达到特异性检测寨卡病毒抗体的目的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种空间邻近化学发光二步法检测抗体的试剂盒及方法，该试剂盒解决了空间邻近化学发光技术无法完成二步法检测的局限性；在检测体系中导入链霉亲和素/生物素系统，应用空间邻近化学发光技术能够完成需要二步法才能完成检测的临床项目，从而提高空间邻近化学发光技术临床应用范围和价值。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

本发明第一方面提供一种空间邻近化学发光二步法检测抗体的试剂盒，该试剂盒中固相包被物是生物素标记的抗原，而H·阿哈万-塔夫狄发明专利固相包被物是抗体；所述试剂盒包括：

发光标记物、酶标记物、生物素标记抗原固相包被物、辅助剂、触发剂和校准品；

所述发光标记物原料组分包括9,10-二氢吖啶标记的抗人免疫球蛋白单克隆抗体；

所述酶标记物原料组分包括HRP标记的亲和素/链霉亲和素。

优选地，所述酶标记物的原料组分还包括0.05M磷酸盐缓冲液；

优选地，所述酶标记物的制备方法包括：