[发明专利]一种非洲猪瘟病毒的PCR检测试剂盒

说明书

本发明涉及一种非洲猪瘟病毒的PCR检测试剂盒，所述试剂盒包括：引物、Ex Ta q buffer、Ex Taq Hot‑start DNA聚合酶、MgCl2、dNTP，其中引物序列为：Primer:F5’‑TAGAGGACGATACGATGGT‑3’，R 5’‑CGAATGGCTACGGATGAA‑3，本发明试剂盒引物是针对2018年在中国流行的非洲猪瘟病毒保守序列设计，可以更高效、灵敏的检测目前国内流行的非洲猪瘟病毒，且本发明试剂盒具有良好的特异性、敏感性和通用性。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种非洲猪瘟病毒的PCR检测试剂盒。

背景技术

非洲猪瘟(African swine fever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fevervir us，ASFV)引起的烈性传染病，世界动物卫生组织将其列为法定上报的动物疫病，在我国动物病原微生物名录中，也被列为一类动物疾病，给疫区国家造成巨大的经济损失。

1921年，ASF最早在肯尼亚出现，最开始ASF主要局限于非洲地区，到2007年，该病爆发于格鲁吉亚，随后疫情迅速蔓延至整个高加索地区和俄罗斯联邦、白俄罗斯和乌克兰，最终于2014年传到了欧盟，2018年8月3日，中国确诊首例非洲猪瘟疫情，这次疫情给我国带来了巨大的经济损失，影响了我国国民生活质量。

PCR检测具有检测特异性高、灵敏度强、操作简单、可大批量检测等特点，用于检测各种组织、体液中病原微生物的核酸，与其它试验相比，此方法更加快速、敏感，且不需要分离培养病原微生物，并能进行大批量的流行病学调查，然而最近的两份研究报告分别显示OIE推荐的常规PCR敏感性和特异性降低，推测可能是因为病毒变异引起的，因此有必要针对现在主流病毒株保守序列设计新的PCR引物，本发明特别的选择2018年国内流行的非洲猪瘟病毒保守序列设计PCR引物，可以更高效、灵敏的检测目前国内流行的非洲猪瘟病毒。

发明内容

本发明的目的之一是提供检测非洲猪瘟病毒的PCR引物，该引物是针对2018年在中国流行的非洲猪瘟病毒保守序列设计，可以更高效、灵敏的检测目前国内流行的非洲猪瘟病毒。

本发明的目的之二是提供一种检测非洲猪瘟病毒的试剂盒。

为达到上述目的，本发明通过以下技术方案实现：

本发明首先公开了检测非洲猪瘟病毒的PCR引物：

Primer:F:5’-TAGAGGACGATACGATGGT-3’(Seq ID No.1)，R:5’-CGAATGGCTACGGATGAA-3’(Seq ID No.2)，长度241bp；

本引物是首先从NCBI上获得2018年在中国流行的非洲猪瘟序列(MK128995.1)，通过NCBI Blast功能，获得保守序列，比对结果见图1；再使用Primer Premier 6设计引物；

本发明还公开了一种非洲猪瘟病毒的PCR检测试剂盒，包括：引物、Ex Taq buffer、Ex Taq Hot-start DNA聚合酶、MgCl₂、dNTP；

本发明还公开了所述试剂盒在检测非洲猪瘟病毒中的应用，包括以下步骤：

①提取待测样品的DNA；

②以待测样品的DNA为模板，采用本试剂盒建立PCR反应体系进行PCR扩增；

本发明PCR反应的体系如下：总体积20μl，10×Ex Taq buffer 2.0μl、1.5U/μl ExTaq Hot-start DNA聚合酶0.2μl、10μM引物1μl、2.5μM dNTPs 2.0μl、20mM MgCl₂2μl、DNA2μl、3ddH₂O 10.8μl；