[发明专利]特异性结合CEA的核酸适配体及其应用

说明书

本发明属于分子生物医学技术与医学生物领域，涉及特异性结合CEA的核酸适配体及其筛选、鉴定及应用，本发明基于CELL‑SELEX技术和聚丙烯酰胺凝胶电泳相结合的CEA核酸适配体筛选方法，筛选出了一种特异性结合CEA的核酸适配体，制备方法简便，这种核酸适配体还可以携带分子标记或者化疗药物用于肿瘤(大肠癌、胰腺癌、胃癌、乳腺癌、甲状腺髓样癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、泌尿系肿瘤、结肠癌)的诊断和治疗。

技术领域

本发明属于分子生物医学技术与医学生物领域，涉及特异性结合CEA的核酸适配体及其筛选、鉴定及应用，具体还涉及该核酸适配体在设计、制备验证、应用于基础研究与临床治疗各个方面。

背景技术

核酸适配体(又称适配体，aptamer)是通过指数富集的配体系统进化(systematicevolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技术筛选得到的能够与靶分子特异性结合的一小段ssDNA或RNA。适配体具有靶分子广泛、亲和力强、易修饰等优点，在分子化学、食品安全、临床诊断与治疗等方面应用广泛。

Cell-SELEX是利用组合化学的原理，在体外构建一个人工合成的随机寡核苷酸文库，经过文库中序列与靶标的特异性结合，筛选目标核酸适配体的一种新技术。由于随机文库中含有大量一级结构不同的单链寡核苷酸片段，他们在溶液中与靶分子相遇时，可以形成不同的空间结构，由于其空间结构的多样性，可供靶分子通过构象匹配的方式筛选出能与其具有高亲和力和特异性的核酸序列。

癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)是从结肠癌和胚胎组织中提取的一种肿瘤相关抗原，是一种具有人类胚胎抗原特性的酸性糖蛋白，存在于内胚层细胞分化而来的癌症细胞表面，是细胞膜的结构蛋白。在细胞浆中形成，通过细胞膜分泌到细胞外，然后进入周围体液。因此，可从血清、脑脊液、乳汁、胃液、胸腹水及尿液、粪便等多种体液和排泄物中检出。CEA可以作为早期诊断结肠癌和直肠癌的特异性标志物，CEA在胃肠道的恶性肿瘤、乳腺癌、肺癌及其他恶性肿瘤的血清中都有升高。所以癌胚抗原是一种广谱肿瘤标志物。

目前科研中还尚未有CEA核酸适配体及其筛选方法报道，且传统SELEX筛选过程耗时耗力，经多轮筛选才能得到特异性较强的适配体，因此迫切需要建立一种能够特异性靶向的CEA核酸适配体，并需要提供一种简单方便、效果突出的筛选方法。

发明内容

本发明提供特异性结合CEA的核酸适配体及其应用，并建立了基于CELL-SELEX技术和聚丙烯酰胺凝胶电泳相结合的CEA核酸适配体筛选方法。本发明提供了一种特异性靶向CEA的生物制剂，制备方法简便，这种核酸适配体还可以携带分子标记或者化疗药物用于肿瘤(大肠癌、胰腺癌、胃癌、乳腺癌、甲状腺髓样癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、泌尿系肿瘤、结肠癌)的诊断和治疗。

为了实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案为：

一种特异性结合CEA的核酸适配体，所述核酸适配体的序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明还提供一种特异性结合CEA的核酸适配体引物，其特征在于，所述引物序列如下：

上游引物：5’-TGCGCTCTAGAGACGAAT-3’；

下游引物：5’-GTATACCTGCAGCTGAGG-3’；

生物素标下游引物：5’–Biotin-GTATACCTGCAGCTGAGG-3’。