[发明专利]一种利用TORC1关键基因突变株靶向识别蛋白食品中特殊氨基酸产生的方法

说明书

本发明属于食品技术领域，公开了一种利用TORC1关键基因突变株靶向识别蛋白食品中特殊氨基酸产生的方法，本发明通过对18种氨基酸添加对尖孢镰孢菌野生株、Gtr1、Gtr2、Sch9与Tap42基因敲除突变及回补株的菌落生长、产孢、产T‑2的调控作用，深度阐述氨基酸对镰孢菌TORC1通路介导下的生长和代谢的调控作用。由上述研究表明，可以通过本发明上述方法初步鉴别样品中所含有的氨基酸种类，从而为鉴别食品中氨基酸种类提供新方法，新思路。

技术领域

本发明涉及食品技术领域，更具体地，涉及一种利用TORC1关键基因突变株靶向识别蛋白食品中特殊氨基酸产生的方法。

背景技术

真菌细胞中，TORC1可感知环境中的营养物质、生长因子、压力等信号，来参与调节蛋白质翻译、核糖体合成、基因转录等信号通路，进而调节真菌的生长及代谢。上游响应元件Gtr1与Gtr2结合为异源二聚体，可介导上游多个信号通路，进而通过下游效应器调控细胞的生理过程，而下游支路中，Sch9与Tap42作为代谢效应元件，可响应上级通路传导的信号因子并通过下游调控镰孢菌的生长代谢。但Gtr1、Gtr2、Sch9与Tap42单一元件由TORC1通路介导对菌丝生长及次生代谢物生成的调控作用，目前还未有报道。

氨基酸作为TORC1信号通路的激活因子，具有显著调控细胞功能的作用。氨基酸根据性质的不同，可分为酸性氨基酸、碱性氨基酸、支链氨基酸、含硫氨基酸等。在不同种类的氨基酸激活下，可通过真菌TORC1元件传达不同的响应信号，对特定氨基酸进行响应，并通过下游支路的协同作用吸收利用于生长代谢。但目前对不同种类的氨基酸如何调控镰孢菌的生长与代谢，目前还深入研究。

发明内容

本发明为了克服现有技术中存在的上述缺陷，首先提供了一种利用尖孢镰孢菌和/或尖孢镰孢菌TORC1关键基因突变株靶向识别蛋白食品中特殊氨基酸产生的方法。

本发明的第二个目的是提供上述方法的应用。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

一种利用尖孢镰孢菌和/或尖孢镰孢菌TORC1关键基因突变株靶向识别蛋白食品中特殊氨基酸产生的方法，所述尖孢镰孢菌的保藏编号为GDMCC 60824；所述尖孢镰孢菌TORC1关键基因突变株包括尖孢镰孢菌基因敲除株△FoGtr1、△FoGtr2、△FoSch9、△FoTap42和尖孢镰孢菌基因回补株△FoGtr1-C、△FoGtr2-C、△FoSch9-C、△FoTap42-C；所述生长和代谢指标包括：菌落生长、产孢能力和产毒能力；

(1)当利用尖孢镰孢菌识别时，包括以下步骤：

S11、待测样品的制备：将蛋白食品制成待测样品溶液；

S12、将S11制备得到的待测样品溶液与尖孢镰孢菌共培养作为实验组；

S13、结果判读：与安慰剂组相比较，实验组中尖孢镰孢菌的生长和代谢指标发生变化，则所述待测样品溶液中含有特殊氨基酸；所述特殊氨基酸包括L-Asp、L-Cys、L-Glu、L-Met、L-Leu、L-Val、L-Try、L-Ala、Gly、L-Phe、L-Tyr、L-Arg、L-Lys。

(2)当利用尖孢镰孢菌和尖孢镰孢菌TORC1关键基因突变株识别时，包括以下步骤：

S21、待测样品的制备：将蛋白食品制成待测样品溶液；

S22、将S21制备得到的待测样品溶液分别与尖孢镰孢菌、尖孢镰孢菌TORC1关键基因突变株共培养，分别计为野生株实验组、△FoGtr1组、△FoGtr2组、△FoSch9组、△FoTap42组、△FoGtr1-C组、△FoGtr2-C组、△FoSch9-C组、△FoTap42-C组；