[发明专利]一种抗CIB单链抗体及其筛选方法和应用

说明书

本发明公开了一种抗CIB单链抗体及其筛选方法和应用。该单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；编码该单链抗体的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明利用抗体基因工程技术和噬菌体展示技术构建CIB鼠源免疫噬菌体单链抗体库，从中筛选出CIB的ScFv，为后期建立CIB的免疫学快速检测方法提供理论依据和物质基础。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种抗CIB单链抗体及其筛选方 法和应用。

背景技术

目前，检测西布特罗残留的方法主要集中于液相色谱-质谱联用(Liquidchromatography-massspectrometry,LC-MS)、气相色谱-质谱联用(Gaschromatography-massspectrometry,GC-MS)、毛细管电泳(Capillaryelectrophoresis,CE)等方法。以上方法均为仪器确证法，检测的精度 和准确度十分可靠，但由于以上方法均存在仪器贵、操作繁锁、需专业人员等 问题，难以满足日常化快速检测的要求。基于抗原抗体特异性识别反应的免疫 化学筛选法则可以满足日常化快速检测的要求，该方法的核心是必须获得稳定、 特异、灵敏的抗体。目前关于西布特罗抗体鲜有报道，因此开发CIB抗体对构 建和完善我国药物残留检测体系具有重要意义。

发明内容

针对现有技术中的上述不足，本发明提供一种抗CIB单链抗体及其筛选方 法和应用，开发得到的抗CIB单链抗体具有优异的特异性和灵敏度，能够用于 CIB的免疫学检测的构建。

为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种抗CIB单链抗体，该单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

进一步地，单链抗体的轻链可变区和重链可变区通过连接多肽连接。

进一步地，连接多肽的基因为编码3组重复Gly₄Ser的核苷酸序列。

一种编码上述抗CIB单链抗体的基因，该基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2 所示。

一种表达载体，包括上述核苷酸。

一种CIB抑制剂，包括上述抗CIB单链抗体。

一种噬菌体，该噬菌体可表达上述基因。

上述抗CIB单链抗体在CIB免疫学检测中的应用。

一种用于进行CIB免疫学检测的试剂盒，包括上述抗CIB单链抗体。

一种筛选上述抗CIB单链抗体的方法，包括以下步骤：

(1)构建CIB完全抗原；

(2)提取经CIB完全抗原免疫后的样本RNA，然后PCR扩增分别得到轻 链可变区基因和重链可变区基因，再用连接片段连接；

(3)将步骤(2)所得基因克隆至载体中，然后转化至大肠杆菌内，经噬 菌体拯救后获得CIB噬菌体单链抗体库，然后通过制备得到的完全抗原筛选得 到该抗CIB单链抗体。

进一步地，步骤(3)筛选过程中使用含有过量载体蛋白的TBS作为CIB 噬菌体单链抗体库的稀释液。

进一步地，步骤(3)中所用载体为噬菌粒载体pCANTAB5E，其在单链抗 体与PIII蛋白之间存在琥珀型止子TAG。

本发明的有益效果：

1、本发明利用抗体基因工程技术和噬菌体展示技术构建CIB鼠源免疫噬菌 体单链抗体库，从中筛选出CIB的ScFv，为后期建立CIB的免疫学快速检测方 法提供理论依据和物质基础。