[发明专利]鉴定肺结节状态的方法和试剂盒

说明书

本文提供了一种在受试者中鉴定肺结节状态的方法，其包括：1)检测来自所述受试者的生物样品中生物标志物基因的甲基化水平和/或miRNA的表达水平，其中所述生物标志物基因包括PTGER4、RASSF1A和SHOX2基因，所述miRNA包括miR‑19b和miR‑320a；以及2)将步骤1)检测的甲基化水平与群体中相应生物标志物的正常甲基化水平进行比较，和/或将步骤1)检测的miRNA的表达水平与相应miRNA的正常表达水平进行比较，以鉴定所述受试者的肺结节状态。本文还提供了用于鉴定受试者中肺结节状态的试剂盒。本文所提供的方法和试剂盒为肺结节良恶性鉴别，肺癌的预测、诊断、和评估提供了一条快速、可靠、准确的新途径。

技术领域

本文涉及在受试者中鉴定肺结节状态的方法和试剂盒，尤其是利用生物标志物基因的甲基化水平和/或miRNA的表达水平来鉴定肺结节状态的方法和试剂盒。

背景技术

肺癌是全世界发病率、死亡率最高的恶性肿瘤，是威胁人类生命和健康的重大疾病。2014年世界卫生组织国际癌症研究署(IARC)发布的世界癌症报告显示：全球癌症负担在不断的加重，其中2012年新发常见癌症中肺癌居首，约为180万例，占常见癌症总数的13％；在常见死亡癌症中，肺癌也居首位，约为160万例，占总数的19.4％。在前十位发病率较高的癌症中，肺癌在男性中的发病率居首，占23％，女性中发病率占14.85％，仅次于乳腺癌的16.97％。另外肺癌的死亡率在男性和女性中也均居榜首，男性中占29.50％，女性约为23.89％。

肺癌的预后较差，并且发现时大多为中晚期。如果能在早期发现并采用一定的有效治疗方法即可大大降低肺癌的死亡率。虽然近几年来肺癌在诊断、手术治疗及研究等方面取得了一系列的进展，但是其五年生存率始终保持在较低的16％。其原因为患者往往在疾病的晚期才发现因而丧失了最佳的治疗时机。国外研究发现Ⅰ期的非小细胞肺癌患者在接受了根治性手术治疗后，其5年的生存率可达到58％-73％，然而目前仅有15％的患者能在早期发现。这说明若要提高肺癌患者的预后主要在于提高肺癌患者的早期诊断效率。

目前，肺癌的诊断主要依靠影像学、痰脱落细胞学及支气管镜活检等技术，这些诊断技术并没有在很大程度上降低肺癌患者的死亡率，因此，如何提高肺癌患者的生存率，依赖于肺癌的早期诊断，筛选和挖掘有价值的早期肺癌的生物学标志物成为亟待解决的问题。利用一些肿瘤标志物，例如CEA(癌胚抗原)，鉴别良恶性肿瘤诊断准确率也只有48％。由于影像学技术在肺癌早期筛查中未能显示出良好的效果，人们开始将目光转移向肺癌早期诊断的分子标志物，遗憾的是迄今为止没有发现一个敏感性和特异性较高的分子标志物。近年来肺癌表观遗传学研究进展较快，特别是DNA甲基化，研究发现在肺癌发生的早期就存在很多特有的肿瘤相关基因出现不同程度的甲基化状态改变，为肺癌早期诊断标志物的探索提供了新的契机。

miRNA在生物学上作用于转录后阶段，是表观遗传学的主要因子之一。其作为早期癌症的标记物，在早期癌症的诊断上有灵敏度的优势，I期肺癌的灵敏度可达80-98％。miRNA是一类内生的、长度约19-25个核苷酸的小RNA，在胚胎发育、细胞分化和器官生成等重要过程中承担着关键性的调控功能。因此，监测miRNA标记物在肿瘤发生、发展中的作用，是其作为肿瘤诊断、预后标志物及治疗靶点的基础。外周血中miRNA是理想的无创液体活检的靶标，可以实现对患者的早期诊断，便于进行动态连续监测。